[发明专利]一种细菌CD-126发酵液及其应用

说明书

技术领域:

本发明涉及一种细菌CD-126发酵液及其应用，属于应用微生物学领域。

背景技术:

植物寄生线虫是植物的重要病害之一，据估计全球每年由植物寄生线虫所造成的作物损失达1570亿美元(Abad et al.2008)，线虫病害成为农业生产中重要的限制因子之一。目前对线虫病害的防治仍然以化学防治为主，但由于化学农药对生态环境的影响以及寄生线虫抗药性的增加，利用线虫天敌进行生物防治备受关注。捕食线虫真菌（Nematode-trapping fungi）是自然界中控制线虫种群数量的一类重要的真菌生物因子，它们利用营养菌丝特化形成的捕食器官，如收缩环、非收缩环、粘性菌丝、粘性分枝、及三维菌网完成对线虫的捕捉和侵染。捕食线虫真菌的捕食器官是其侵染植物寄生线虫的必要条件之一，捕食器官在营养贫瘠的培养基上能够自发产生，也能够通过环境因子（氨基酸和多肽等）的诱导产生。

经文献检索，未发现与本发明内容相同文献的公开报道。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种细菌CD-126发酵液及其应用。

本发明是这样实现的：

本发明使用的细菌菌株是变形杆菌（Proteus sp.）CD-126,菌株CD-126已于2012年7月12日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏号：CGMCC No.6357。

1.细菌CD-126的保存

培养基：LB培养基为常规培养基。培养基的组成和配制方法如下:

LB培养基：称取胰蛋白胨10g，酵母粉5g和NaCl10g用去离子水溶解并定容至1L，调节PH到7.0，加入20g琼脂，121℃灭菌20分钟。

细菌CD-126保存在LB固体培养基上。

2.捕食线虫真菌寡孢节丛孢（Arthrobotrys oligospora）的培养

a.培养基：

CMA培养基：称取20g玉米颗粒,加入1000mL自来水,煮沸20分钟,用四层纱布过滤收集液体，加入20g琼脂，再定容到1L，121℃灭菌20分钟。

b.寡孢节丛孢的活化和孢子培养：在CMA固体培养基上接种寡孢节丛孢，26℃恒温培养箱内培养10天，以得到大量的孢子。用无菌水冲洗CMA平板上的寡孢节丛孢菌丝；用移液器将平板上的液体转移至装有无菌擦镜纸的漏斗内过滤，收集孢子，制备孢子悬液；用血球计数板计数孢子液内的孢子浓度。

3.细菌CD-126发酵液的制备

在装有5-10ml LB液体培养基的试管中接种细菌CD-126，25℃～38℃恒温摇床内培养24-72小时。发酵液用高速离心机在10000rpm下离心5min分离菌液和菌体，吸取上清液放在-4℃的冰箱中备用，得到本发明使用的活性发酵液

4.捕食线虫真菌寡孢节丛孢（Arthrobotrys oligospora）捕食器官的诱导

收集得到寡孢节丛孢的孢子，实验组（三维菌网诱导组）在水琼脂平板上加入CD-126上清液，将上清液和孢子悬液（1:1，v/v）混匀涂在平板上；对照组（培养基）平板上加入LB液体培养基和孢子悬液（1:1，v/v）混匀涂布；将两组平板静置于26℃恒温培养箱内培养。用光学显微镜（Olympus,Japan）观察诱导产生的捕食器官（三维菌网）的形态。

5.细菌CD-126发酵液中挥发性物质对寡孢节丛孢（Arthrobotrys oligospora）捕食器官的诱导

用酒精和紫外杀菌处理过的两格平板作为实验平台，在其中一个格里面倒入灭菌水琼脂。将寡孢节丛孢的孢子铺在水琼脂平板上，在另一个空格中加入细菌发酵液，同时做培养基对照。用光学显微镜（Olympus,Japan）观察诱导产生的捕食器官(三维菌网)的形态。

本发明的优点在于：利用细菌快速诱导捕食线虫真菌产生捕食器官，明显提高了捕食线虫真菌捕食线虫的能力。

附图说明：

附图1：捕食线虫真菌(寡孢节丛孢)的捕食器官诱导（光学显微镜照片）

具体实施方式：

以下是本发明的实施例，但本发明的内容并不局限于此。

实施例的细菌CD-126发酵液的制备过程同发明内容部分的描述。

实施例1：细菌CD-126发酵液对寡孢节丛孢（Arthrobotrys oligospora）捕食器官的诱导。