[发明专利]用于检测小麦抗旱性的引物及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于检测小麦抗旱性的引物及其应用。

背景技术

小麦是我国的重要的粮食作物和重要的战略性储备粮食品种。在各种逆境因子中，干旱已成为限制小麦生产的最主要因子，选育和推广抗旱小麦品种是解决这一难题既经济又有效的途径之一。寻找与其编码基因紧密连锁的分子标记，可为分子标记辅助选择育种奠定基础。

植物在受到水分胁迫后，会诱导产生一系列生理、生化反应以应对水分匮缺。胁迫压力作为信号可以诱导调节一些基因的表达，进而促使蛋白质的组成发生改变，或者合成新的蛋白质，由于蛋白质直接参与植物的应激反应，研究水分胁迫诱导蛋白有助于了解蛋白质与植物适应环境压力之间的关系。Schuppler等通过轻度水分胁迫处理小麦幼苗，发现叶片内分子量34kDa的蛋白含量明显增加。石峰等研究18份小麦品种水分胁迫诱导蛋白与抗旱性的关系，发现小麦在水分胁迫后能够引起分子量约66.2KDa应答蛋白的特异表达，该蛋白在中等及以上抗旱性品种中均有表达，而在弱抗旱性品种中不表达。在此研究的基础上，张洁等研究了30份冬小麦品种（系）幼苗期水分胁迫后叶片中应答蛋白的表达，发现该蛋白与品种的抗旱性紧密相关，并提出此蛋白在水分胁迫下的表达可作为鉴定品种抗旱性的一项指标。任万杰等对150份不同水旱生态型的冬小麦品种（系）进行不同水分条件下的应答蛋白表达分析，发现该蛋白表达的类型与品种水旱生态型间呈极显著相关。王婧等利用SSR标记对杂交组合（邯郸6050×西农2208）F₂群体进行分析，对该应答蛋白基因进行了初步定位，命名为“RpDD”，获得了位于同一侧且距离较远的两个SSR标记Xgwm129和Xgwm304。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测小麦抗旱的引物及其应用。

本发明所提供的用于检测小麦抗旱性的引物，为由如下引物对A和引物对B组成的引物对组：

所述引物对A具体为由序列表中序列1所示的单链DNA和序列2所示的单链DNA组成的引物对；所述引物对B为由序列表中序列3所示的单链DNA和序列4所示的单链DNA组成的引物对。

在实际应用中，所述引物对组（序列1、序列2、序列3和序列4）中的四条单链DNA在PCR反应体系中的摩尔比为1：1：1：1。

在本发明的一个实施例中，在所述引物对组中，组成每个引物对的两条单链DNA在PCR反应体系中的工作浓度均为0.25μM。

含有所述引物对组的试剂盒也属于本发明的保护范围。

所述引物对组的制备方法也属于本发明的保护范围。

所述引物对组的制备方法可包括将所述引物对组中各序列所示单链DNA分别单独包装的步骤。

所述试剂盒的制备方法也属于本发明的保护范围。

所述试剂盒的制备方法可包括如下步骤：将所述引物对组中各序列所示单链DNA分别单独包装后，与下述物质中的至少一种包装在同一试剂盒内：PCR反应缓冲液、DNA聚合酶和4种dNTP。

其中，序列1由25个核苷酸组成；序列2由25个核苷酸组成；序列3由20个核苷酸组成；序列4由20个核苷酸组成。

所述引物对组在检测小麦抗旱性中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明的再一个目的是提供一种检测小麦抗旱性的方法。

本发明所提供的检测小麦抗旱性的方法，可为如下（a）-（c）中任一种：

（a）具体可包括如下（a1）-（a2）步骤：

（a1）以待测小麦的基因组DNA为模板，以由所述引物对A（由序列表中序列1所示的单链DNA和序列2所示的单链DNA组成的引物对）进行PCR扩增，获得PCR产物；

（a2）检测步骤（a1）所得PCR产物的大小，按照如下方法确定所述待测小麦的抗旱性：若所述PCR产物中含有大小为101bp的DNA片段，则所述待测小麦为抗旱性强的小麦或候选为抗旱性强的小麦；若所述PCR产物中含有大小为117bp的DNA片段，则所述待测小麦为抗旱性弱的小麦或候选为抗旱性弱的小麦。

（b）具体可包括如下（b1）-（b2）步骤：

（b1）以待测小麦的基因组DNA为模板，以由所述引物对B（由序列表中序列3所示的单链DNA和序列4所示的单链DNA组成的引物对）进行PCR扩增，获得PCR产物；