[发明专利]一种检测七星瓢虫的引物对、试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及用于检测七星瓢虫的引物对、试剂盒及其检测方法。

背景技术

七星瓢虫Coccinella septempunctata L.是一种鞘翅目瓢虫科捕食性天敌昆虫，成虫和幼虫可捕食麦蚜、棉蚜、槐蚜、桃蚜、介壳虫、壁虱等害虫，减轻树木、瓜果及各种农作物遭受害虫的损害，被人们称为“活农药”。除了冬季外，户外有蚜虫发生的地方均有机会找到前来觅食的七星瓢虫成虫，但其较少成群聚集。一年发生多代，以成虫过冬，次年4月出蛰，产卵于有蚜虫的植物上。分布范围广，在中国（北京、河北、黑龙江、吉林、河南、陕西、甘肃、新疆、西藏、云南、贵州、四川、湖北、湖南、浙江、福建、广东、广西、海南、台湾等）、蒙古、朝鲜、日本、印度、前苏联、古北区、欧洲都有它的踪迹。

七星瓢虫成虫体长：5.2-7.0mm，体宽：4.0-5.6mm。体周缘卵形，背面光滑无毛。头黑色。前胸背板黑色，在其前角上各有一个大型近于四边形的淡黄色斑，伸展到缘折上形成窄条。小盾片黑色。鞘翅红色或橙红色，两鞘翅上共有7个黑斑，其中位于小盾片下方的小盾斑被鞘翅分割为两边一半，其余每一鞘翅上各有3个黑斑。鞘翅基部靠小盾片两侧各有一个小三角形的白斑。七星瓢虫以鞘翅上有7个黑色斑点而得名。每年发生世代数因地区不同而异。例如，在河南安阳地区每年发生6-8代。北方寒冷地区，发生世代数则较少。七星瓢虫成虫寿命长，平均77天。1头七星瓢虫雌虫可产卵567-4475粒，平均每天产卵78.4粒，最多可达197粒。七星瓢虫取食量大小与气温和猎物密度有关。以捕食蚜虫为例，在猎物密度较低时，捕食量随密度上升而呈指数增长；在密度较高时，捕食量则接近极限水平。较高的气温可影响七星瓢虫的活动能力，提高其捕食率。据统计，不同虫态七星瓢虫对烟蚜的平均日取食量分别为：1龄10.7头，2龄33.7头，3龄60.5头，4龄124.5头，成虫130.8头。七星瓢虫近80天的生命期可取食上万头蚜虫。七星瓢虫对人、畜和天敌动物无毒无害，作为农田重要的天敌昆虫，其合理利用可减轻农药使用，减少环境污染，取得良好的经济和生态效益。早在20世纪70年代黄河下游地区即已用助迁法利用七星瓢虫防治棉花和小麦蚜虫，90年代开始人工繁殖，并用于生产。

瓢虫种类全世界记载约500属5000种，中国已记录近400种。种类繁多且仅根据形态描述准确判断瓢虫种类有一定的难度。此外，不同瓢虫间还普遍存在集团内捕食的现象，但常规的肠道解剖、行为观察等方法无法准确评估这种重要的捕食关系。因此要更好地鉴定瓢虫种类及研究瓢虫的集团内捕食作用，需要建立一套快速而准确的分子检测方法，但目前对于七星瓢虫尚没有标准的检测方法。聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术可根据物种特异性引物清楚区分至种，以其特异性强、灵敏度高、简便快速的特点在物种种类鉴定中占据重要地位。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种快速、简单、特异且灵敏地检测七星瓢虫的鉴定方法。

为了实现本发明的目的，本发明首先提供一种用于检测七星瓢虫的引物对，所述引物对序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的序列。

本发明还提供一种含有SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示序列的引物对的试剂盒。

本发明还提供一种检测七星瓢虫的方法，包括用所述引物对或者含所述引物对的试剂盒进行PCR扩增的步骤。

具体步骤为，从样品中提取基因组DNA为模板；利用所述引物对或者含所述引物对的试剂盒中的引物对作为PCR扩增的引物，进行PCR扩增，得到扩增产物；检测扩增产物，并作出判断。

所述PCR反应体系为20μL，其中10×EasyTaq buffer2.0μL、dNTP（2.5mM）0.4μL、EasyTaq聚合酶（5U/μL）0.2μL、上游引物和下游引物（10p/mol）各0.4μL、样品基因组DNA1.0μL、超纯水15.6μL。

所述PCR扩增程序为94℃预变性4min；94℃变性30s、54℃退火30s、72℃延伸30s，40个循环。

所述检测扩增产物是采用电泳检测，出现189bp左右的特异性扩增条带即判断为检出七星瓢虫。

本发明提供了前述引物对及试剂盒在检测七星瓢虫中的应用。