[发明专利]新型等温多自配引发扩增技术(IMSA)

权利要求书

1.一种利用改进的等温多自配引发扩增方法检测病原微生物的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于等温核酸扩增方法的四条混合式引物两条非混合式引物，以及羟基萘酚蓝染料或羟基萘酚蓝染料与GeneFinder ^TM的混合染料，

其中，当所述检测病原微生物为手足口病病原柯萨奇病毒A16时，所述四条混合式引物的序列分别为：

CVA16-DsF:5’TTGTCACTAGCATTAGACGACGCCAGATTAGGCACTGGTGTTG3’;

CVA16-DsR :5’CAGGAGACAGCCATTGGGACGTGGTGGGCATTGTGA3’;

CVA16-FIT:5’T GGAATGATGGTTCAACACACATCTAAGCCGCGGAGACAGG3’;

CVA16-RIT :5’AGATGTGTGTTGAACCATCATTCCACTGACAAGACCAGCACGG3’;

两条非混合式引物的序列分别为：

CVA16-SteR：5’ TTGTCACTAGCATTAGACGACGC3’;

CVA16-SteF :5’CAGGAGACAGCCATTGGGA3’，

所述引物CVA16-DsF和引物CVA16-DsR组成的引物对：所述引物CVA16-FIT和所述引物CVA16-RIT组成的引物对：引物CVA16-SteR和引物 CVA16-SteF组成的引物对=1 ：4 ：8；

当所述检测病原微生物为人肠道病毒 EV71 时，所述四条混合式引物的序列分别为：

EV71-DsF:5’ ACCATTGATAAGCACTCGCAGGGTCAAGCTGTCAGACCCTCC3’;

EV71-DsR:5’ GAACACAAACAGGAGAAAGATCTTGTGAGAACGTGCCCATCA3’;

EV71-FIT :5’TCCGAATGTGGGATATCCGTCATAAGTTTCAGTGCCATTCATGTC

EV71-RIT:5’ TTATGACGGATATCCCACATTCGGAAGGACATGCCCCGTATT3’,

两条非混合式引物的序列分别为：

EV71-SteR :5’ACCATTGATAAGCACTCGCAGG3’

EV71-SteF:5’GAACACAAACAGGAGAAAGATCTTG3’,

所述引物EV71-DsF 和所述引物 EV71-DsR组成的引物对：所述引物EV71-FIT和所述引物 EV71-RIT组成的引物对：所述引物EV71-SteR和所述引物 EV71-SteF组成的引物对 =1：4 ：8；

当所述检测病原微生物为人甲型 H7N9 流感病毒的 HA 基因时，

所述四条混合式引物的序列分别为：

H7-DsF:5’ GCCTGATTCTCTGAGAATTTGCCTTGATGTCTGTTATCCTGGGA3’;

H7-DsR:5’ ACAGTGGAATAAGAACTAATGGAGCGAGCCATTTCATTTCTGCA3’;

H7-FIP:5’ GAATCCCATTGCTTCCTTGTCACGTGAATGAAGAAGCTCTG3’;

H7-RIT :5’TGACAAGGAAGCAATGGGATTCTCCTGATCTCCTACATGCA3’;

两条非混合式引物的序列分别为：

H7-SteR:5’ GCCTGATTCTCTGAGAATTTGCCT3’;

H7-SteF:5’ ACAGTGGAATAAGAACTAATGGAGC3’，

所述引物H7-DsF和 H7-DsR组成的引物对：所述引物H7-FIP和所述引物 H7-RIT组成的引物对：所述引物H7-SteR和所述引物 H7-SteF组成的引物对 =1 ：4。