[发明专利]一种检测鸡胡须性状的方法

权利要求书

1.一种用于检测鸡胡须性状的分子标记组合，其特征在于，其为CNV1、CNV2和CNV3，这三个分子标记物理位置位于鸡27号染色体1702269-1721521bp、4470331-4503417bp、3578409-3592890bp处，CNV1和CNV2连接的基因序列如SEQ ID No.7所示，CNV2和CNV3连接的基因序列如SEQ ID No.8所示，CNV3和CNV1连接的基因序列如SEQ ID No.9所示。 

2.权利要求1所述的分子标记组合在鸡育种中的应用。 

3.用于检测权利要求1所述分子标记组合的引物组合，其特征在于，其核苷酸序列为： 

CNV1-2F TTTGTTGTCTCCTTGCATCATT 

CNV1-2R CCATGTCAGCACAGTAACGATT 

CNV2-3F ATGTTGGTTGTGTGCCAAGTAG 

CNV2-3R TTTCCCCTCGTCTGCTTTATTA 

CNV3-1F ACAAGTCAGAGAGGCAATCGAC 

CNV3-1R CCATACAGCCTCAGGTAAGGAC。 

4.权利要求3所述的引物组合在制备检测鸡胡须性状试剂盒中的应用。 

5.权利要求3所述的引物组合在鸡育种中的应用。 

6.一种检测鸡胡须性状的试剂盒，其特征在于，含有权利要求3所述的引物组合。 

7.一种检测鸡胡须性状的方法，其特征在于，包括以下步骤： 

（1）以待测鸡的基因组DNA为模板，用三对引物分别进行PCR反应；所述三对引物分别是： 

CNV1-2F TTTGTTGTCTCCTTGCATCATT 

CNV1-2R CCATGTCAGCACAGTAACGATT 

CNV2-3F ATGTTGGTTGTGTGCCAAGTAG 

CNV2-3R TTTCCCCTCGTCTGCTTTATTA 

CNV3-1F ACAAGTCAGAGAGGCAATCGAC 

CNV3-1R CCATACAGCCTCAGGTAAGGAC； 

（2）将三次PCR反应的扩增产物用琼脂糖凝胶检测，若CNV1、CNV2、CNV3引物的PCR扩增反应的目的片段分别为3200bp、501bp、411bp，则结果为阳性，否则为阴性。 

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤（1）中引物CNV3-1F、CNV3-1R和CNV2-3F、CNV2-3R的PCR扩增反应体系为： 

总体系为25μl时，基因组DNA：50ng，1×PCR Buffer，dNTP4mM，上、下游引物各10pmol，康为Taq DNA聚合酶1.25U，加水补至25μl反应体系； 

引物CNV1-2F、CNV1-2R的PCR扩增反应体系为：基因组DNA：50ng，1×PCR Buffer，dNTP4mM，上、下游引物各10pmol，Long AmpTaq DNA聚合酶NEB1.25U，加水补至25μl反应体系。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤（1）中引物CNV3-1F、CNV3-1R及CNV2-3F、CNV2-3R的PCR反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性30sec，60℃退火30sec，72℃延伸20sec，共35个循环；72℃终延伸7min;12℃保存； 

引物CNV1-2F、CNV1-2R的PCR反应条件为：94℃预变性3min；94℃变性10sec，57℃退火30sec，65℃延伸4sec，共35个循环；65℃终延伸7min；12℃保存。 

10.权利要求7-9任一所述的方法在鸡育种中的应用。