[发明专利]植物表达载体及其应用

权利要求书

1.一种植物表达载体，其特征在于，所述载体包含：

第一表达盒；

第二表达盒，所述第二表达盒与所述第一表达盒相连，位于所述第一表达盒的下游；以及

第三表达盒，所述第三表达盒分别与所述第一表达盒和所述第二表达盒相连，位于所述第二表达盒的下游以及所述第一表达盒的上游，

其中，

所述第一表达盒包含：

第一核酸分子，所述第一核酸分子为Bt基因；

第一启动子，所述第一启动子为CaMV35S启动子，与所述第一核酸分子相连，位于所述第一核酸分子的上游，用于启动所述第一核酸分子表达；以及

第一终止子，所述第一终止子为NOS终止子，与所述第一核酸分子相连，位于所述第一核酸分子的下游，用于终止所述第一核酸分子表达，

所述第二表达盒包含：

第二核酸分子，所述第二核酸分子为bar基因；

第二启动子，所述第二启动子为CaMV35S启动子，与所述第二核酸分子相连，位于所述第二核酸分子的上游，用于启动所述第二核酸分子表达；以及

第二终止子，所述第二终止子为NOS终止子，与所述第二核酸分子相连，位于所述第二核酸分子的下游，用于终止所述第二核酸分子表达，

所述第三表达盒包含：

第三核酸分子，所述第三核酸分子为NPT II基因；

第三启动子，所述第三启动子为NOS启动子，与所述第三核酸分子相连，位于所述第三核酸分子的上游，用于启动所述第三核酸分子表达；以及

第三终止子，所述第三终止子为NOS终止子，与所述第三核酸分子相连，位于所述第三核酸分子的下游，用于终止所述第三核酸分子表达。

2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述第二表达盒中进一步包含第四核酸分子，所述第四核酸分子为gus A基因，位于所述第二核酸分子和所述第二终止子之间。

3.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述第二核酸分子为Bt-4AB，具有SEQ ID NO：1所示的核酸序列。

4.一种用于制备抗除草剂及抗虫转基因植物的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1-3任一项所述的载体。

5.权利要求1-3任一项所述的载体，权利要求4所述的试剂盒在制备抗除草剂及抗虫转基因植物中的用途。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述植物为棉花。

7.一种构建权利要求1-3任一项所述的植物表达载体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将bar基因连接至PMD18-T载体上，以便获得PMD18-T-bar载体；

利用限制性内切酶XbaⅠ和BamHⅠ对所述PMD-18T-bar载体进行双酶切，并纯化回收小片段；

利用限制性内切酶XbaⅠ和BamHⅠ对pBI121空载体进行双酶切，并纯化回收大片段；

将所述小片段连接至所述大片段上，以便获得pBI121-bar载体；

利用限制性内切酶Hand III对所述pBI121-bar载体进行单酶切，并纯化回收pBI121-bar载体大片段；

利用限制性内切酶Hand III对Bt-4AB进行双酶切，并纯化回收Bt-4AB小片段；以及

将所述Bt-4AB小片段连接至所述pBI121-bar载体大片段上，以便获得pBI121-bar/Bt载体，所述pBI121-bar/Bt载体即为权利要求1-3任一项所述的植物表达载体。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，按照4:1的体积比，将所述bar基因与所述PMD18-T载体混合，进行过夜连接，以便将所述bar基因连接至所述PMD18-T载体上，

任选地，利用T4DNA连接酶，按照摩尔比1：3的比例，将所述小片段连接至所述大片段上。

9.一种制备抗除草剂及抗虫转基因植物的方法，其特征在于，

利用权利要求1-3任一项所述的植物表达载体转化受体植物，

任选地，进一步包括：

将所述植物表达载体转化农杆菌LBA4404；以及

利用经过转化的农杆菌LBA4404的菌液侵染所述受体植物，

任选地，所述植物为棉花，优选海岛棉，更优选新海14，

任选地，所述受体植物呈愈伤组织的形式。

10.一种抗除草剂及抗虫转基因植物，其是通过权利要求9所述的方法制备的。