[发明专利]用于检测瓜类蔓枯病的特异性引物及试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测瓜类蔓枯病的特异性引物，其特征在于：上游引物具有如SEQ ID NO:1所示的碱基序列，下游引物具有如SEQ ID NO:2所示的碱基序列。

2.一种用于检测瓜类蔓枯病的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含权利要求1所述的特异性引物。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含PCR反应所需的缓冲液、酶体系以及用于提取待测样品DNA的试剂。

4.一种用于检测瓜类蔓枯病的方法，其特征在于：采用权利要求2或3所述的试剂盒对待测样品进行检测。

5.一种用于检测瓜类蔓枯病的方法，其特征在于：提取待测样品DNA作为模板，利用权利要求1所述的特异性引物进行PCR扩增反应，PCR产物经凝胶电泳后用溴化乙锭染色，根据凝胶中条带大小判断：若存在469-bp的DNA条带，则检测样品中含有瓜类蔓枯病菌。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述的PCR反应的扩增体系为：1μL DNA模板（约0.4ng），引物各0.2μmol l^－1，dNTP0.2μmol l^－1,MgCl₂2mmol l^－1,1×缓冲液，聚合酶1.5U个单位，双蒸水补足至25μL。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述的PCR反应条件为：95℃预变性3min，94℃变性30s，53℃退火30s，72℃延伸30s，进行35个循环，最后72℃延伸5min。PCR产物用1.5%的琼脂糖在1×TAE缓冲液中电泳后，用溴化乙锭显色拍照。