[发明专利]一种白念珠菌WIP1基因的用途及缺失WIP1基因的白念珠菌减毒株

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种白念珠菌白灰形态转换调控因子Wip1的用途及缺失WIP1基因的白念珠菌减毒株。

背景技术

白念珠菌（Candida albicans）是一种临床上分离到的一种机会性人体致病真菌，特别在免疫下调的病人中，如器官移植病人，艾滋病毒感染者等，可以引起广泛的浅部和深部系统感染，感染部位包括口腔，女性阴道等，引起鹅口疮，阴道炎等，也可以侵入表皮和内皮细胞进入血液而到达内脏器官，如肾脏，脑部等，导致败血症，严重可以导致死亡（Odds,F.C.1994.J.Am.Acad,Dermatol.31:S2-S5.）。白念珠菌在不同的生长条件下，有不同的生长形态，这些不同形态之间可以在一定条件下进行转换。包括酵母态（yeast form），和菌丝态（hyphae），以及白菌（white phase）和灰菌（opaque phase）之间的转换。这种形态转化能力直接影响白念珠菌的致病能力（Odds,F.C.1985.Crit Rev Microbiol.12:45-93;Brown,A.J.P.et al.1999.Trends Microbiol.7:334-338.），形态转换能力缺陷的菌株其系统感染能力大大下降或消失（Lo,H.J.et al,Cell90:939-949.）。白-灰转换首先在临床上分离的WO-1菌株中发现。这两种形态的菌也具有不同的致病性，白菌在系统感染中具有较强的致病能力，而灰菌在表皮感染中具有较强的致病能力。因而白灰转换是念珠菌为了适应不同的微环境而产生的两种形态，这两种形态对于念珠菌的致病能力有重要作用。同时，白灰转换对于白色念珠菌实现其交配也是必要的。与酿酒酵母类似，白色念珠菌为了实现同源重组，需要经过一个交配的过程，有研究表明白念珠菌灰菌形态交配效率大约是白菌形态的10⁶倍，因此，白色念珠菌要实现交配，首先要进行白灰转换，由白菌转换为灰菌形态，才可以实现交配。

现有技术已通过功能互补的方法找到了调控白色念珠菌白灰转换的关键性因子，Wor1（White-Opaque Regulator1），Wor1在念珠菌白灰形态转换中起着关键性的调控作.。Northern杂交显示，Wor1的表达呈现“全或无”的形式，根据这一结果，我们提出了Wor1以自激活的方式调控白灰转换的正反馈模型。

同时，有研究表明，Wor1蛋白可以结合在一系列灰菌特异性表达的基因的启动子区域，从而调控灰菌特异性基因的转录，此外，Wor1还可以结合在其自身的启动子区域，这点也支持了我们上面提到的正反馈调控模型。

在证实了Wor1调控白灰转换的功能以后，我们想对其调控的具体机制做出研究，例如上述“全或无”的正反馈途径是如何实现的。为此，我们利用酵母双杂交系统在白色念珠菌的基因组文库中筛选了与Wor1有相互作用的蛋白。筛库结果是得出一系列与Wor1有相互作用的蛋白，其中就包含具有特征性的SP-RING结构的Wip1，Wip1的基因全长为1524bp,之前有报导其转座突变影响白念珠菌的丝状生长，推断含有MIZ锌指结构域，在酿酒酵母尚未发现同源基因。

发明内容

本发明的目的在于研究白念珠菌白灰转换关键性调控因子Wor1的相互作用蛋白Wip1在白灰转换及毒性表现中的功能及作用。

本发明首先公开了白念珠菌WIP1基因的用途，为用于制备WIP1基因不表达的白念珠菌wip1/wip1缺失株，或者用于制备、筛选白念珠菌治疗药物。

本发明的WIP1基因含有如SEQ ID NO：31所示的核苷酸序列，其在白念珠菌中表达SUMO E3连接酶。

WIP1所表达的SUMO E3连接酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：32所示。

较优的，本发明所述wip1/wip1缺失株为白念珠菌的减毒株。在所述白念珠菌wip1/wip1缺失株中WIP1基因不表达。

本发明所述白念珠菌治疗药物为以WIP1基因为治疗靶基因，使WIP1基因不表达或过表达的药物、或者以WIP1基因表达的蛋白为拮抗对象的药物；或者以WIP1基因和其他基因共同作为靶基因加以沉默的药物。以WIP1基因为靶点，筛选或制备使该基因不表达或过表达的药物，用于使白念珠菌毒性减弱，从而治疗白念珠菌感染。例如，该白念珠菌治疗药物可以通过RNA干扰或者基因重组的方法使WIP1基因不表达；或者通过制备Wip1蛋白拮抗剂，使WIP1基因表达的SUMO不发挥作用；或者通过外源导入WIP1基因，使WIP1基因过表达。