[发明专利]一种白念珠菌WIP1基因的用途及缺失WIP1基因的白念珠菌减毒株

权利要求书

1.一种白念珠菌减毒株，为将野生型白念珠菌中WIP1基因进行敲除获得的白念珠菌wip1/wip1缺失株，所述WIP1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：31所示；所述减毒株中WIP1基因不表达。

2.如权利要求1所述的白念珠菌减毒株，其特征在于，所述白念珠菌减毒株为SUMO E3连接酶基因缺失株。

3.如权利要求2所述的白念珠菌减毒株，其特征在于，所述SUMO E3连接酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：32所示。

4.权利要求1-3任一权利要求所述白念珠菌减毒株的构建方法，为通过同源重组的方法对白念珠菌中WIP1基因的两个拷贝进行了敲除，具体步骤如下：

1)敲除质粒的构建：分别用SEQ ID NO：1-2所示引物和SEQ ID NO：3-4所示引物从白念珠菌基因组DNA中扩增WIP1上游和下游序列片段，分别反向和顺向连接入pMD18-T的TA克隆位点得到质粒pT-FU和pT-FD；用BamHI-KpnI将包含WOR1下游序列的片段从pT-FD上切下插入pT-FU的相应位点得到质粒pT-FUD；将来源于pCUB6的带有BamHI-BglII黏性末端的HisG-URA3-HisG片段反向插入pT-FUD的相应位点得到白念珠菌WIP1基因敲除质粒pT-WIP1KO；

2)将前述敲除质粒pT-WIP1KO经HindIII酶切后转化白念珠菌，经细胞内同源重组得到第一拷贝WIP1敲除的单敲除菌株；

3)用线性化的前述敲除质粒pT-WIP1KO再次转入步骤2)中第一拷贝WIP1敲除的单敲除菌株，经细胞内同源重组得到第二拷贝WIP1敲除的wip1/wip1双缺失株。

5.权利要求1-3任一权利要求所述白念珠菌减毒株在研究白念珠菌白灰形态转换及毒性功能中的应用。