[发明专利]一株人源具有抗氧化功能干酪乳杆菌grx12及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别涉及具有抗氧化功能干酪乳杆菌grx12菌株及该菌株在抗氧化产品方面的应用。

背景技术

生物氧化是机体新陈代谢的重要生理过程，但此过程中会产生自由基等各种活性氧分子(ROS)。尽管正常情况下，机体存在着自由基清除系统，但如果机体受到某些因素影响，自由基清除系统出现故障导致体内自由基过度产生，则会作用于机体内的蛋白质、核酸等分子，造成细胞损伤，给机体健康带来很大威胁，导致如癌症、白内障、肝硬化、动脉粥样硬化等恶性疾病。通过膳食中补充抗氧化物质可以增强机体的抗氧化能力，但许多化学合成的抗氧化物存在安全问题，此外，从膳食中补充的抗氧化剂因其在吸收的过程中易被消化分解成为其他不具备抗氧化能力的物质，或是不易被机体吸收而直接排出体外。因此，开发具有高抗氧化活性且安全的健康膳食补充剂成为一个很有意义的研究课题。

乳酸菌(Lactic Acid Bacteria，LAB)作为肠道常驻菌群，可以直接在机体氧化损伤的重点部位——肠道发挥抗氧化作用，维持肠道处于氧化还原平衡状态。并且乳酸菌在肠道定植后还能不断增殖，产生更多能够发挥抗氧化作用的乳酸菌，源源不断地在肠道扮演ROS清道夫的角色。此外，大量的研究已充分验证乳酸菌的安全性。因此乳酸菌的抗氧化作用与传统的抗氧化剂相比有更多的优势，筛选具有良好抗氧化能力的乳酸菌也已成为当前益生菌的热门研究课题。

理想的益生菌制剂的菌株，应具有以下几个属性：（1）来源（最好来源于人体）；（2）安全性；（3）在载体（如食物）中的活力和活性；（4）胃酸和胆汁的抗性；（5）在消化道中存留能力；（6）抗菌物质的产生等。

目前筛选高抗氧化活性乳酸菌的研究所用菌株大多从发酵食物或动物肠道中分离获得，对长寿人群肠道的乳酸菌抗氧化活性研究报道则较少。而益生菌的一个重要属性是最好来源于人体本身。

本发明人针对上述课题，以江苏如皋长寿村人群肠道乳酸菌为目标菌群，经体外抗氧化试验筛选出具有较好抗氧化活性的益生菌，并研究了其对人工胃液、人工肠液及胆盐的耐受能力以进一步验证其在肠道中的存活能力。

发明内容

本发明的目的在于提供一株益生菌株。

本发明的菌株是干酪乳杆菌grx12，保藏号为CGMCC No：7696。所述干酪乳杆菌grx12是从江苏如皋长寿村人群肠道中分离的具有显著抗氧化能力且对人工胃液、人工肠液和胆盐具有较好耐受能力的益生菌菌株。

本发明的还公开了所述干酪乳杆菌在制备具有抗氧化作用方面的功能性食品或药品中的应用，特别是在制备发酵乳制品中提高发酵乳的抗氧化作用的应用。

附图说明

图1为本发明干酪乳杆菌grx12的菌落特征图；

图2为本发明干酪乳杆菌grx12的菌体特征图；

图3为本发明干酪乳杆菌grx12的生长曲线图；

图4为本发明干酪乳杆菌grx12的16S rDNA序列PCR扩增结果图。

本发明的菌株grx12已于2013年6月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（地址为北京市朝阳区北辰西路1号院，中国科学院微生物研究所），保藏号为CGMCC No：7696，分类命名：干酪乳杆菌Lactobacillus casei。

具体实施方式

1．样品的采集

样品为：新鲜、一星期内未服用抗生素的江苏如皋长寿村人群的黄软大便。用灭菌竹签挑取粪便内部中心粪便样品放入运输培养基中，再加入1mL灭菌液体石蜡密封后，迅速置于冰盒内，带回实验室进行微生物菌群分析。

2.乳杆菌的分离与纯化

在无菌操作台上用无菌样品稀释液将采集的样品稀释至相应稀释度后从试管中取0.5mL稀释液，接种于改良MRS培养基的灭菌培养皿中，置于厌氧罐中于37℃培养48h。观察并记录菌落形态和革兰氏染色菌体形态特征，并同时进行过氧化氢酶试验。将革兰氏染色阳性、过氧化氢酶试验阴性的杆菌暂定为乳杆菌并进一步进行平板划线纯化，共获取75株乳杆菌，加脱脂乳作为保护剂进行真空冷冻干燥后，置于-80℃保藏。

3.乳杆菌消化道逆环境耐受能力试验