[发明专利]表达HBsAg的重组酿酒酵母菌发酵培养基及其配制方法和发酵工艺

权利要求书

1.一种表达HBsAg的重组酿酒酵母菌的发酵培养基，其特征在于，发酵培养基包括有以下组分：酵母粉30～45g/L、大豆蛋白胨25～40g/L、葡萄糖12～26g/L、海藻糖10～30g/L及腺嘌呤0.05～0.2g/L。

2.如权利要求1所述的表达HBsAg的重组酿酒酵母菌的发酵培养基，其特征在于，各组分具体含量为：

酵母粉35g/L、大豆蛋白胨32g/L、葡萄糖20g/L、海藻糖10g/L、腺嘌呤0.05g/L。

3.如权利要求1所述的表达HBsAg的重组酿酒酵母菌的发酵培养基，其特征在于，各组分具体含量为：

酵母粉42g/L、大豆蛋白胨35g/L、葡萄糖17g/L、海藻糖17g/L、腺嘌呤0.1g/L。

4.如权利要求1-3中任一项所述的表达HBsAg的重组酿酒酵母菌的发酵培养基，其特征在于：所述重组酿酒酵母菌为腺嘌呤缺陷型酵母菌。

5.如权利要求4所述的表达HBsAg的重组酿酒酵母菌的发酵培养基，其特征在于：所述重组酿酒酵母菌为Saccharomyces cerevisiae2150-2-3（pHBS56-GAP347/33）。

6.一种表达HBsAg的重组酿酒酵母菌发酵培养基的配制方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

分别称取1个单位体积的酵母粉30～45g/L、大豆蛋白胨25～40g/L、海藻糖10～30g/L及腺嘌呤0.05～0.2g/L，混合后加入到发酵罐中，搅拌均匀后经121℃灭菌30分钟；

用注射用水对葡萄糖溶解，得到1个单位体积的葡萄糖溶液12～26g/L；采用无菌操作将所得的葡萄糖溶液经0.2μm滤器除菌过滤后，加入到所述发酵罐中，并搅拌均匀，即得所述发酵培养基。

7.一种表达HBsAg的重组酿酒酵母菌的发酵工艺，其特征在于，包括以下步骤：

制备种子液；

按照如权利要求6所述的方法配制发酵培养基，在接种前标定溶氧电极的溶氧值为100%；

以10%的接种量将所述种子液接种于所述发酵培养基中发酵；

在发酵过程中分多次采用无菌操作加入除菌过滤后的葡萄糖溶液，每次加入的葡萄糖相对于发酵液的浓度为6g/L；

发酵至第48～55小时后，终止发酵。

8.如权利要求7所述的表达HBsAg的重组酿酒酵母菌的发酵工艺，其特征在于，所述制备种子液步骤具体包括：

取表达HBsAg的重组酿酒酵母菌种，在0.25L锥形瓶中27-29℃摇瓶培养17-19小时、在2L锥形瓶中27-29℃摇瓶培养17-19小时、在70L种子罐中27-29℃发酵培养16-22小时后，得到种子液。

9.如权利要求8所述的表达HBsAg的重组酿酒酵母菌的发酵工艺，其特征在于，所述菌种为美国默克公司以DNA重组技术构建的表达HBsAg的重组酿酒酵母工作种子批菌种。

10.如权利要求9所述的表达HBsAg的重组酿酒酵母菌的发酵工艺，其特征在于：在所述发酵过程中，分多次在发酵第12、17、21小时加入所述葡萄糖溶液。