[发明专利]一种检测罕见遗传病戈谢病相关风险基因的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种检测罕见遗传病戈谢病相关风险基因的试剂盒，通过同时检测与戈谢病关联的β-葡萄糖苷脂酶（β-glucosidase）-葡萄糖脑苷脂酶基因（glucerebrosidase gene，GBA）的单核苷酸多态性位点基因型来评估个体罹患戈谢病的风险性。

背景技术

戈谢病（Gaucher disease，GD）是溶酶体贮积病中最常见的一种，为常染色体隐性遗传。Brady等在1964年发现葡萄糖脑苷脂的贮积是由于β-葡萄糖苷脂酶（β-glucosidase）-葡萄糖脑苷脂酶（glucerebrosidase，GBA）缺乏所致。β-葡萄糖脑苷脂酶可以将葡萄糖脑苷脂降解成葡萄糖和神经酰胺。该酶缺乏可导致葡萄糖脑苷脂在体内单核吞噬细胞系统中聚集，主要聚集在脾脏、淋巴结和骨髓组织细胞，肝脏星形细胞、中枢神经系统小胶质细胞、骨破骨细胞、肺泡巨噬细胞等。戈谢病主要临床表现为：骨鲠死、骨骼畸形、肝脾肿大、贫血、血小板减少症。少数病例表现为神经系统受累的症状和体征。临床上，戈谢病根据神经系统受累程度划分为三型：Ⅰ型：非神经病变型，最常见的类型，约占95%。成年期发病，缓慢进展，临床表现复杂，从无症状到严重的器官受累均可表现，少数病例可表现为帕金森综合症；Ⅱ型：急性神经病变型，婴儿期发病，有严重神经系统受累，都与围生期或出生1年内死亡；Ⅲ型：亚急性或慢性神经病变型，儿童期发病，至少有一种神经系统表现，比如小脑性共济失调、肌阵挛、癫痫发作或痴呆，预后不良，通常于儿童或青春期死亡。

戈谢病呈常染色体隐性遗传，由葡萄糖脑苷脂酶基因（glucerebrosidase gene，GBA）突变所引起。GBA基因位于染色体1q21上，有11个外显子。目前已报道的GBA基因突变有200多种，其中常见的有N370S（c.1226 A＞G），84GG（c.84-85insG），L444P（c.1448T＞C）和IVS2+1G→A。研究发现在犹太民族戈谢病人中N370S突变占到78%，而在非犹太民族戈谢病患者中最常见的突变则是L444P（36%），其次是N370S（29%）。中国戈谢病患者GBA基因突变分析显示最常见的突变依次是：L444P、F213I、R353W，而N370S突变在中国戈谢病患者中很罕见。

发明内容

基于葡萄糖脑苷脂酶基因（glucerebrosidase gene，GBA）上的1个SNP位点多态性可用来评估个体罹患戈谢病风险性的基础上，本发明提供一种检测罕见遗传病戈谢病相关风险基因的试剂盒

试剂盒包括：

检测GBA基因上rs131678号SNP多态性基因型的特异性引物对及特异性荧光探针对；

荧光定量PCR反应组件（包括Taq酶、dNTP混合液、MgCl₂溶液、反应缓冲液、去离子水等）。

本试剂盒中所述的特异性引物对是指针对GBA基因上rs131678号SNP位点而设计，能特异性扩增出包含这1个SNP位点的DNA片段的引物对。设计这类引物对是本领域技术人员能够轻易完成的。优选地，试剂盒中包含具有SEQ ID NO：1和2所示序列的引物对。特异性引物对可用常规的合成技术进行合成。本领域的技术人员能够理解，本发明的引物不限于这一对引物。

本试剂盒中所述的特异性荧光探针对是指针对GBA基因上rs131678号SNP位点而设计，能通过荧光定量PCR技术特异性检测出这一个SNP位点基因型的Taqman探针对。设计这类探针是本领域技术人员能够轻易完成的。优选地，试剂盒中包含具有SEQ ID NO：3和4所示序列的Taqman探针对。特异性荧光探针对可用常规的探针合成技术进行合成。本领域的技术人员能够理解，本发明的特异性荧光Taqman探针对不限于这一对探针，所有可用于荧光定量PCR法检测本发明中所述用来评估个体罹患戈谢病风险性的一个SNP位点的探针均在本发明范围内。

本发明试剂盒的组分和含量包括：

5μl 10 X荧光定量PCR反应缓冲液，

0.5μl 25mM dNTP混合液，

3μl 25mM MgCl₂溶液，

0.125μl （5units/μl）Taq DNA聚合酶，

20μM特异性引物对 每条引物各0.225μl，

10μM特异性荧光探针对 每条探针各0.25μl，

去离子水26.625μl。

本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20℃。