[发明专利]用于以RT-LAMP法检测H7N9禽流感病毒的引物、试剂盒、检测方法

权利要求书

1.一种用于以RT-LAMP法检测H7N9禽流感病毒的引物，其特征是，包括H7引物组和N9引物组；其中，

H7引物组包括外引物对H7-F3和H7-B3，内引物对H7-FIP和H7-BIP，以及环引物H7-LB；H7-F3的序列如SEQ ID NO:1所示，H7-B3的序列如SEQ ID NO:2所示，H7-FIP的序列如SEQ ID NO:3所示，H7-BIP的序列如SEQ ID NO:4所示，H7-LB的序列如SEQ ID NO:5所示；

N9引物组包括外引物对N9-F3和N9-B3，内引物对N9-FIP和N9-BIP，以及环引物N9-LB；N9-F3的序列如SEQ ID NO:6所示，N9-B3的序列如SEQ ID NO:7所示，N9-FIP的序列如SEQ ID NO:8所示，N9-BIP的序列如SEQ ID NO:9所示，N9-LB的序列如SEQ ID NO:10所示。

2.一种以RT-LAMP法检测H7N9禽流感病毒的试剂盒，其特征是，包括权利要求1所述用于以RT-LAMP法检测H7N9禽流感病毒的引物，其中由H7引物组构成的引物混合液放置于Ⅰ管中，由N9引物组构成的引物混合液放置于Ⅱ管中。

3.根据权利要求2所述以RT-LAMP法检测H7N9禽流感病毒的试剂盒，其特征是，所述Ⅰ管中，外引物对H7-F3和H7-B3、内引物对H7-FIP和H7-BIP、及环引物H7-LB的摩尔比为1:(5-10):(2-6)；所述Ⅱ管中，外引物对N9-F3和N9-B3、内引物对N9-FIP和N9-BIP、及环引物N9-LB的摩尔比为1:(5-10):(2-6)。

4.根据权利要求3所述以RT-LAMP法检测H7N9禽流感病毒的试剂盒，其特征是，还包括2×反应液，酶液，及显色试剂；

所述酶液包括浓度为6-12U/μl的BstDNA聚合酶，以及浓度为8-16U/μl AMV逆转录酶；

所述2×反应液包括30-60mmol/L pH8.8的Tris-HCl，16-30mmol/L的KCl，10-30mmol/L的(NH₄)₂SO₄，质量浓度为0.1-0.3%的Triton X-100，由浓度均为2.0-3.6mmol/L的dATP、dTTP、dCTP、dGTP组成的dNTPs，0.1-2.0mmol/L的甜菜碱C₅H₁₁NO₂，以及12-20mmol/L的MgSO₄；

所述显色试剂为浓度2-20mmol/L的金属离子指示剂HNB储存液。

5.根据权利要求4所述以RT-LAMP法检测H7N9禽流感病毒的试剂盒，其特征是，还包括阳性对照品：包括HA阳性对照品和NA阳性对照品，浓度分别为20-100mg/L，且由以下方法获得：先分别构建含有H7N9禽流感病毒HA基因的质粒H7-PCRⅡ、以及含有H7N9禽流感病毒NA基因的质粒N9-PCRⅡ，再分别进行体外转录反应获得RNA片段，分别纯化后即得HA阳性对照品和NA阳性对照品。

6.权利要求1所述引物制作以RT-LAMP法检测H7N9禽流感病毒的试剂盒的用途。