[发明专利]禽肺炎病毒SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR检测试剂盒

权利要求书

1.用于检测禽肺炎病毒的引物对，由引物1和引物2组成，所述引物1为序列表中序列1所示的单链DNA，所述引物2为序列表中序列2所示的单链DNA。

2.用于检测禽肺炎病毒的试剂，由权利要求1所述的引物对、SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR扩增缓冲液和水组成。

3.根据权利要求2所述的试剂，其特征在于：所述SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR扩增缓冲液，包括dNTPs、Mg²⁺、SYBR Green I、DNA聚合酶、反转录酶和RNA酶抑制剂。

4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于：所述SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR扩增缓冲液为如下缓冲液A或缓冲液B：

所述缓冲液A中，所述dNTPs、所述Mg²⁺、所述DNA聚合酶、所述反转录酶和所述RNA酶抑制剂的配比为：0.1μmol：0.25μmol：5U：200U：40U；

所述缓冲液B，由反转录缓冲液和SYBR荧光PCR缓冲液组成；所述反转录缓冲液中含有配比为0.02μmol：0.1μmol：2.5U：20U的所述dNTPs、所述Mg²⁺、所述反转录酶和所述RNA酶抑制剂；所述SYBR荧光PCR缓冲液中含有配比为0.01μmol：0.025μmol：5U的所述dNTPs、所述Mg²⁺和所述DNA聚合酶，同时还含有所述SYBRGreen I。

5.用于检测禽肺炎病毒的试剂盒，含有下述a）和b）：

a）禽肺炎病毒阳性质粒；

b）权利要求1所述引物对，或权利要求2-4中任一所述试剂。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述禽肺炎病毒阳性质粒为含有序列表中序列3的第753-849位核苷酸的质粒。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述禽肺炎病毒阳性质粒为将序列表中序列3的第753-849位核苷酸所示DNA片段与pMD18-T载体相连后得到的重组质粒。

8.根据权利要求1所述的引物对，或权利要求2-4中任一所述的试剂，或权利要求5-7中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述引物1和所述引物2的摩尔比为1：1。

9.如下c）或d）的应用：

c）权利要求1所述的引物对在制备权利要求2-4中任一所述试剂，或权利要求5-7中任一所述试剂盒中的应用；

d）权利要求1所述的引物对，或权利要求2-4中任一所述的试剂，或权利要求5-7中任一所述的试剂盒，在制备检测或辅助检测待测样品中是否含有禽肺炎病毒的产品中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：d）所述应用中，所述检测或辅助检测待测样品中是否含有禽肺炎病毒为用权利要求1所述的引物对，或权利要求2-4中任一所述的试剂，或权利要求5-7中任一所述的试剂盒对所述待测样品进行SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR反应；

所述进行SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR反应的退火温度为60℃-62℃。