[发明专利]用于鉴定条斑紫菜耐高温品系TM-18的方法、分子标记及其构建方法

权利要求书

1.用于鉴定条斑紫菜耐高温品系TM-18的分子标记，其特征在于，含有如SEQID No.1所示的核苷酸序列。

2.权利要求1所述用于鉴定条斑紫菜耐高温品系TM-18的分子标记，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.用于鉴定条斑紫菜耐高温品系TM-18的分子标记的特异性扩增引物，其特征在于，正向引物和反向引物的核苷酸序列分别如SEQ ID No.2和No.3所示。

4.权利要求3所述的特异性扩增引物应用于鉴定条斑紫菜耐高温品系TM-18。

5.鉴定条斑紫菜耐高温品系TM-18的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）总DNA的提取：收集新鲜的待鉴定条斑紫菜叶状体，液氮研磨，提取总DNA；

（2）使用权利要求3所述的特异性扩增引物，对步骤（1）中所获得的总DNA进行PCR扩增；

（3）取步骤（2）的PCR扩增产物进行电泳检测，PCR扩增产物中出现长度为341bp的特异性片段，则所鉴定的条斑紫菜为条斑紫菜耐高温品系TM-18；若没有出现341bp的特异性片段，则所鉴定的条斑紫菜不是条斑紫菜耐高温品系TM-18。

6.权利要求5所述鉴定条斑紫菜耐高温品系TM-18的方法，其特征在于，步骤（2）所述PCR扩增的条件为：93～95℃预变性4.5～6min；93～94.5℃变性27～35s，51～52.5℃退火40～50s，71～73℃延伸40～50s，以上三个步骤重复32～40个循环；71～73℃延伸6～8min。

7.权利要求5所述鉴定条斑紫菜耐高温品系TM-18的方法，其特征在于，步骤（2）所述PCR扩增的条件为：94℃预变性5min；94℃变性30s，52℃退火45s，72℃延伸45s，以上三个步骤重复35个循环；72℃延伸7min。

8.权利要求1或2所述用于鉴定条斑紫菜耐高温品系TM-18的分子标记的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）总DNA的提取：收集新鲜的条斑紫菜叶状体，液氮研磨，提取总DNA；

（2）SRAP标记分析：使用SRAP成套引物对步骤（1）中所得总DNA进行SRAP-PCR扩增；引物组合ME1/EM6的扩增产物即为鉴定条斑紫菜耐高温品系TM-18的分子标记TM1；

所述引物ME1序列为：

5’-TGAGTCCAAACCGGATA-3’

所述引物EM6序列为：

5’-GACTGCGTACGAATTGCA-3’。

9.权利要求8所述的构建方法，其特征在于，步骤（2）所述SRAP-PCR反应程序为：93～95℃预变性4.5～6min；93～95℃变性50s～1min，34～36℃退火50s～1min，71～73℃延伸50s～1min，重复4～7个循环；93～95℃变性50s～1min，47～48.5℃退火50s～1min，71～73℃延伸1.5～2.5min，重复32～40个循环；71～73℃延伸9～12min。

10.权利要求8所述的构建方法，其特征在于，步骤（2）所述SRAP-PCR反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性1min，35℃退火1min，72℃延伸1min，重复5个循环；94℃变性1min，48℃退火1min，72℃延伸2min，重复35个循环；72℃延伸10min。