[发明专利]转基因玉米品系MLPA检测的探针及制备长探针的引物有效
申请号: | 201310252962.1 | 申请日: | 2013-06-24 |
公开(公告)号: | CN103397086A | 公开(公告)日: | 2013-11-20 |
发明(设计)人: | 凌杏园;陈枝楠;潘广;章桂明;向才玉;康林;程颖慧;龙海;郑耘;陈菲 | 申请(专利权)人: | 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/11 |
代理公司: | 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司 44281 | 代理人: | 彭家恩;彭愿洁 |
地址: | 518045 *** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 转基因 玉米 品系 mlpa 检测 探针 制备 引物 | ||
1.一种转基因玉米品系MLPA检测的探针,其特征在于:所述探针包括第一组探针至第十组探针中的至少一组,每组探针中分别含有长探针和短探针,长探针的5’端具有磷酸化修饰;
第一组探针的短探针含有Seq ID No.1所示序列,长探针含有Seq ID No.2所示序列;
第二组探针的短探针含有Seq ID No.3所示序列,长探针含有Seq ID No.4所示序列;
第三组探针的短探针含有Seq ID No.5所示序列,长探针含有Seq ID No.6所示序列;
第四组探针的短探针含有Seq ID No.7所示序列,长探针含有Seq ID No.8所示序列;
第五组探针的短探针含有Seq ID No.9所示序列,长探针含有Seq ID No.10所示序列;
第六组探针的短探针含有Seq ID No.11所示序列,长探针含有Seq ID No.12所示序列;
第七组探针的短探针含有Seq ID No.13所示序列,长探针含有Seq ID No.14所示序列;
第八组探针的短探针含有Seq ID No.15所示序列,长探针含有Seq ID No.16所示序列;
第九组探针的短探针含有Seq ID No.17所示序列,长探针含有Seq ID No.18所示序列;
第十组探针的短探针含有Seq ID No.19所示序列,长探针含有Seq ID No.20所示序列。
2.根据权利要求1所述的探针,其特征在于:所述第一组探针至第十组探针依序为检测转基因玉米品系TC1507、Bt176、T25、NK603、MON863、MON89034、MIR604、GA21、Bt11和59122的探针。
3.一种转基因玉米品系的MLPA检测方法,其特征在于:采用权利要求1或2所述的探针以受检样品的DNA为模板进行杂交。
4.根据权利要求3所述的检测方法,其特征在于:还包括采用一对通用引物对杂交后连接起来的长探针和短探针进行PCR扩增,所述通用引物的上游/下游引物分别含有Seq ID No.21和Seq ID No.22所示序列。
5.一种制备权利要求1或2所述的长探针的引物,其特征在于:所述引物包括第一引物组至第七引物组中的至少一组,每个引物组中分别含有非限定引物和限定引物,非限定引物的5’端具有磷酸化修饰;
第一引物组的非限定引物含有Seq ID No.23所示序列,限定引物含有Seq ID No.24所示序列;
第二引物组的非限定引物含有Seq ID No.25所示序列,限定引物含有Seq ID No.26所示序列;
第三引物组的非限定引物含有Seq ID No.27所示序列,限定引物含有Seq ID No.28所示序列;
第四引物组的非限定引物含有Seq ID No.29所示序列,限定引物含有Seq ID No.30所示序列;
第五引物组的非限定引物含有Seq ID No.31所示序列,限定引物含有Seq ID No.32所示序列;
第六引物组的非限定引物含有Seq ID No.33所示序列,限定引物含有Seq ID No.34所示序列;
第七引物组的非限定引物含有Seq ID No.35所示序列,限定引物含有Seq ID No.36所示序列。
6.根据权利要求5所述的引物,其特征在于:所述第一引物组至第七引物组依序为制备第四组探针至第十组探针的长探针的引物组。
7.一种用于转基因玉米品系MLPA检测的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒中含有权利要求1或2所述的探针。
8.根据权利要求7所述的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒中还含有一对通用引物,所述通用引物的上游/下游引物分别含有Seq ID No.21和Seq ID No.22所示序列。
9.根据权利要求7或8所述的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒中还含有DNA杂交缓冲液、DNA连接酶和PCR反应缓冲液中的至少一种。
10.一种用于制备权利要求1或2所述的长探针的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒中含有权利要求5或6所述的引物。
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