[发明专利]一种可同时检测多个HBV耐药突变位点的新方法

权利要求书

1.一种可同时检测多个乙型肝炎病毒耐药突变位点的检测方法，步骤为：

1）设计和合成一对引物，如SEQ ID No.1-2所示；

2）提取乙型肝炎病毒DNA，并以步骤1所述的一对引物为扩增引物进行扩增，测定扩增产物的熔解温度Tm；依据熔解温度Tm，通过改变扩增变性温度确定关键变性温度Tc；

3）通过Tc建立COLD-PCR反应体系条件并反应得到COLD-PCR产物；

4）将COLD-PCR产物进行sanger双向序列测定。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述的COLD-PCR包括以下两种方式：fast COLD-PCR和full COLD-PCR。

3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于fast COLD-PCR的反应条件为：

95℃预变性30s；95℃变性10s，56℃退火延伸30s，5个循环；Tc℃变性20s，56℃退火延伸30s，35个循环。

4.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于full COLD-PCR的反应条件为：

95℃预变性30s；95℃变性10s，56℃退火延伸30s，5个循环；95℃变性3s，70℃杂交120s， Tc℃再变性20s，56℃退火延伸30s，35个循环。

5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于Tc为83.0℃。