[发明专利]一种构建野生番茄里基茄再生体系及遗传转化体系的方法有效
申请号: | 201310217605.1 | 申请日: | 2013-06-02 |
公开(公告)号: | CN103314850A | 公开(公告)日: | 2013-09-25 |
发明(设计)人: | 李成伟;徐克东;谭光轩;常云霞;张福丽;刘坤;张怡;张菊;吴曼曼;黄晓晖 | 申请(专利权)人: | 周口师范学院 |
主分类号: | A01H4/00 | 分类号: | A01H4/00 |
代理公司: | 北京法思腾知识产权代理有限公司 11318 | 代理人: | 高宇 |
地址: | 466001 河*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 构建 野生 番茄 里基茄 再生 体系 遗传 转化 方法 | ||
1.一种构建野生番茄里基茄再生体系的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)里基茄无菌苗的培养;
(2)在愈伤诱导培养基CIM中诱导里基茄的根、茎和叶三种不同外植体产生愈伤组织与丛生芽点,其中愈伤诱导培养基CIM的配方为:MS盐+B5有机+20mg/L甘露醇+0.2mg/L玉米素+1.2mg/L生长素+30g/L蔗糖+7.8g/L琼脂粉,pH5.8;
(3)将诱导出的丛生芽进行单株分离,转入无菌苗培养基中诱导生根成苗。
2.根据权利要求1所述的构建野生番茄里基茄再生体系的方法,其特征在于,在步骤(1)中,选择健康饱满的里基茄种子,进行消毒、低温催芽、黑暗孵育,然后于25℃,16h光照/8h黑暗,光照度为120μmol.m-2s-1的组培条件下进行培养。
3.根据权利要求1所述的构建野生番茄里基茄再生体系的方法,其特征在于,在步骤(2)中,选取根、茎和叶三种外植体,置于愈伤诱导培养基上,然后于25℃,16h光照/8h黑暗,光照度为120μmol.m-2s-1的组培条件下进行培养。
4.一种构建野生番茄里基茄遗传转化体系的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)里基茄无菌苗的培养;
(2)对里基茄的三种外植体分别进行农杆菌侵染与共培养,其中共培养培养基CCPM的配方为:MS盐+B5有机+120mg/L肌醇+120mg/L磷酸二氢钾+0.8mg/L盐酸硫胺素+0.25mg/L2,4-D+0.15mg/L激动素+20mg/L甘露醇+30g/L蔗糖+7.8g/L琼脂粉,pH5.8;
(3)将共培养后的外植体转入筛选培养基中进行抗性芽筛选,抗性芽培养成实生苗;
(4)炼苗、驯化与移栽。
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