[发明专利]一种抗感染细胞及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗感染细胞，尤其涉及一种表达I58基因的肠上皮细胞及其制备方法。

背景技术

乳酸杆菌是益生菌中及其重要的一种，可以与靶细胞黏附，竞争抑制致病性大肠杆菌（EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）和侵袭性大肠杆菌（EIEC）等致病菌对人体肠道屏障功能的损害；激发继发于黏附的细胞内信号转导途径，降低肠上皮细胞（IEC）的通透性；调节人体肠道黏膜免疫功能，促进树突状细胞（DC）分化成熟，以及诱导肠道T细胞分化成熟等。益生菌在肠道内的黏附和定植能抑制致病菌的损伤，对于保护肠道黏膜的完整性具有重要意义。

近几年来研究表明，乳酸杆菌表面蛋白（Surface layer protein,SLP）在其发挥益生作用时起着核心作用。SLP由蛋白或糖蛋白亚单位晶体状排列而成，具有疏水性，氨基酸序列分析发现其主要包括谷氨酸和天门冬氨酸（约15%），较多的赖氨酸（约10%），以及大量的疏水性氨基酸（40-60%）。其外表面由一定大小和不同形态的孔隙组成多孔状结构，包括众多的特征性亚单位，通过非共价键结合在细胞表面的基底层，形成一定的固定结构，构成70%的网格状表面，分子质量从25-71kDa，最大可达200kDa，SLP占细菌总蛋白的10%-15%，其中疏水氨基酸约占31.9%-38.7%。SLP酸性氨基酸数量较碱性氨基酸高12.5%，等电点（Predicted isoelectric,PI）约为9.35～10.4，并成为乳酸杆菌SLP特征性的标志。通过蛋白质序列分析以及循环二色性测量的方法，提示其二级结构组成包括约为20%的α-螺旋和40%的β-折叠，而不规则折叠及β-转角约5%～45%。目前国内外的研究均表明，SLP是乳酸杆菌发挥其生理功能的重要结构基础，使其不仅能够适应外界环境的变化，而且能够增强人类肠上皮细胞（Intestinal epithelial cell,IEC）的抗损伤作用，SLP在乳酸杆菌益生方面的作用已得到充分肯定。然而，益生菌在使用过程中也存低效性问题，即在病理状态下，益生菌剂量较难在肠道长期维持一个较高的剂量。

综上所述，本领域有必要进一步开发一种方法，能够在微环境中通过细胞等方式预防和/或修复肠损伤。

发明内容

本发明的目的是克服上述不足，提供抗感染细胞，可用于预防和/或修复肠损伤。

本发明提供的抗感染细胞为表达I58基因的肠上皮细胞。

优选地，将含有I58基因的重组载体转化正常肠上皮细胞中，得到表达I58基因的肠上皮细胞。

本发明还提供了一种制备上述抗感染细胞的方法，包括以下步骤：

步骤1，依据I58基因序列设计扩增引物，经PCR克隆I58基因片段；

步骤2，将所得I58基因片段克隆至表达载体中，获得重组载体；

步骤3，转化所述重组载体至正常肠上皮细胞中，得到抗感染细胞。

优选地，在扩增引物设计过程中，使所设计的上游引物在I58基因上游引入BglⅡ酶切位点；使所设计的下游引物在I58基因下游引入XhoⅠ酶切位点。

优选地，步骤1中所述扩增引物如下：

上游引物：5’-atcAAGCTTTTTTCAGTTCAAAATGGTTA-3’；

下游引物：5’-atcctcgagAGTTTTCATCTTAACAACCT-3’；

其中所述上游引物中atc为BglⅡ酶切位点，所述下游引物中atcctcgag为XhoⅠ酶切位点。

优选地，所述表达载体为含有BglⅡ酶切位点和XhoⅠ酶切位点的表达载体。

优选地，所述表达载体为pET32载体。

本发明还提供了上述抗感染细胞在制备预防和修复肠损伤药物或材料中的应用。

益生菌在肠道内的黏附和定植对抑制病菌的定植、移位和感染，维护肠道黏膜的完整性具有特别重要的意义。乳酸杆菌是益生菌中重要的一类，其在发挥益生作用时，表面蛋白（surface layer protein，SLP）的黏附结构起着核心作用。其中，乳酸杆菌表面蛋白的活性片段I58（IMP501-580）为具有黏附活性的片段。