[发明专利]转基因仓鼠及其制备方法

说明书

技术领域

本发明是关于基因工程领域的一个发明，特别是涉及一种转基因仓鼠及其制备方法。

背景技术

近数十年来，由于人类生活方式的改变，代谢性心血管病（糖脂代谢紊乱的动脉粥样硬化性心脑血管病）已经超过肿瘤成为人类死亡率最高的疾病。因此对代谢性心血管病的广泛深入研究已经到了刻不容缓的时期。而这样的研究虽然可以通过对临床病人的直接调研进行，但由于心血管系统的样本难以从病人身上获取，且各种有损伤的实验条件也不可能施加到病人身上，因此应用代谢性心血管病的动物模型来开展相应研究是必不可少的。

随着研究技术的发展，国内外众多科研机构研发出了多种基因修饰的基因工程小鼠用于代谢性心血管病的研究。这些小鼠模型在很大程度上可以模拟人类的疾病状况，大大深化了人们对代谢性心血管疾病本质的认识。

由于小鼠在心血管系统以及代谢上与人类的巨大差别，虽然应用这些基因修饰的基因工程小鼠推进了人们对人类代谢性心血管病的认识，但在这些模型上得到的很多信息，如果要直接应用于人类代谢性心血管病的临床防治上，还是有很大的限制。因此摆在我们面前的一个重要科学问题，是要继续研发出更接近人类代谢性心血管病，且具有与小鼠相似的易繁殖、易饲养、研究周期短等特点的模式动物。

在世界最大的默克制药公司科研部2012年发表的报告中，比较了20多种动物模型（包括多种灵长类和最常用的ApoE和LDL受体基因敲除小鼠）的脂代谢特点和对降脂药物的反应，发现小动物中的仓鼠与人类的相关代谢参数最相近。

仓鼠是一种小型啮齿类动物。与小鼠和大鼠不同，仓鼠的脂蛋白代谢特点在以下几个方面有人类相似：（1）血浆胆固醇酯转运蛋白（CETP）水平高；（2）具有肠道载脂蛋白B编辑功能；（3）肝脂酶锚定在肝脏内皮细胞发挥水解甘油三酯作用；（4）肝LDL受体活性较低。因此，和其它品种的鼠类相比，仓鼠对动脉粥样硬化的易感性明显要高。

通过大量文献检索，国内外目前尚无制备转基因仓鼠方法的报道。我们发现，美国马里兰大学分子神经病毒学实验室主任Robert G Rohwer教授曾于2002年在其“疯牛病蛋白的研究”项目中，委托加州著名生物技术公司TOSK Inc.以基因转座子技术制备用于疯牛病研究的转基因仓鼠。然而3年后的后续报告则提及，该公司未能制备成功转基因仓鼠。虽然他们并没有报道失败的原因，但通过和国内外同行交流了解到，吉林大学畜牧兽医学院、云南动物研究所以及匈牙利和法国曾经有研究组尝试仓鼠的胚胎操作，但由于仓鼠受精卵在体外发育过程中有一种特殊的“双细胞发育阻滞”（block of2cell development）现象，所以回输到体内的受精卵都不能发育为成熟仓鼠胚胎。而体外培养的受精卵大多停滞在双细胞期，因此双细胞阻滞是阻碍成功制备转基因仓鼠的主要原因。

因此，从现有技术来看，仓鼠在代谢性心血管病研究中具有重要的价值，且仓鼠的饲养和繁育成本相对低廉；但是，转基因仓鼠的研究在国内外仍然是空白。有鉴于此，本发明人基于从事此类技术研究多年丰富的实务经验及专业知识，并配合学理的运用，积极加以研究创新，以期创设一种新的转基因仓鼠及其制备方法，使其更具有实用性。经过发明人不断的研究、设计，在长期对仓鼠转基因技术优化的基础上，突破了仓鼠胚胎双细胞发育阻滞的技术瓶颈，成功制备了国际上第一个绿色荧光蛋白基因修饰仓鼠模型。

发明内容

本发明的主要目的在于，克服现有的转基因仓鼠制备方法存在的缺陷，而提供一种新的转基因仓鼠制备方法，所要解决的技术问题是解决现有技术中存在的“双细胞发育阻滞”障碍，从而能够顺利制备转基因仓鼠，使其具有产业上的利用价值。

本发明的另一目的在于，提供一种突破“双细胞发育阻滞”技术障碍而制备的仓鼠，从而为研究代谢性心血管病提供更多的动物模型。

本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本发明提出的一种转基因仓鼠的制备方法，其主要包括如下步骤：收集单个受精卵；将受精卵于体外进行培育；以及在受精卵分裂成2个或2个以上的细胞后，送入仓鼠体内继续进行培育。

本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。

前述的转基因仓鼠及其制备方法，其中所述的受精卵是仓鼠动情周期第三天交配后获得的。

前述的转基因仓鼠及其制备方法，其中所述的将受精卵于体外进行培育的培养液中钙离子浓度为1.5mM，培养温度为39℃。

前述的转基因仓鼠及其制备方法，其中所述的培养液为HECM-10培养基。