[发明专利]一种CD34-SG17多肽片段及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及化学合成技术领域，更具体地，涉及一种CD34-SG17多肽片段及其制备方法和应用。

背景技术

目前，常用的细胞流式抗体大多是用细胞进行免疫的，或这是细胞提取物免疫动物获得，虽能识别该细胞，但抗原表位不清楚，实验数据的理论不准确，特异性差，制备方法复杂，且重复性差，不已人为控制，所以产生的抗体会有误差，会对后期的实验产生不良影响即非特异性反应。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一。

为此，本发明的一个目的在于提出一种亲水性强、免疫原性强且便于合成和纯化的CD34-SG17多肽片段。

根据本发明实施例的CD34-SG17多肽片段，所述多肽片段的核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示。

根据本发明实施例的CD34-SG17多肽片段，亲水性强，结构简单，便于合成和纯化，并且该多肽片段具有较强的免疫原性，用其制备的抗体特异性好，灵敏度高，在组织细胞中的表达部位准确。

本发明的另一个目的在于提出一种CD34-SG17多肽片段的制备方法，其具体操作步骤可以包括以下步骤：

a）提供9-芴基甲氧羰酰基保护的氨基酸（Fmoc-AA）并使其活化，得到活化氨基酸；

b）将所述活化氨基酸与P-羟甲基苯氧甲基多聚乙烯树脂（HMP树脂）反应，得到连接有氨基酸的树脂；

c）脱除所述连接有氨基酸的树脂的Fmoc保护基；

d）将脱除Fmoc保护基的连接有氨基酸的树脂进行活化，将活化后的树脂与过量的活化羧基组份偶联，并脱去偶联后活化氨基组份的氨基保护基；

e）重复步骤a）至步骤d）17次，得到肽树脂；

f）将所述肽树脂分离，得到CD34-SG17多肽化合物粗品。

根据本发明实施例的CD34-SG17多肽片段的制备方法，其合成过程是在自动化的多肽合成仪上完成，制备工艺简便，结构准确，偶联率高，周期短，自动化程度高。

另外，根据本发明上述实施例的制备方法，还可以具有如下附加的技术特征：

根据本发明的一个实施例，在步骤a）中，所述Fmoc-AA通过与人多巴胺脱羧酶（DCC）和羟基苯并三唑（HOBT）反应活化。

根据本发明的一个实施例，所述活化羧基组份从左到右依次为：丝氨酸、赖氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸、蛋氨酸、谷氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、天门冬酰胺、亮氨酸、精氨酸、赖氨酸、甘氨酸和半胱氨酸。

根据本发明的一个实施例，步骤f）包括：

f-1）用三氟乙酸(TFA)结合清除剂与所述肽树脂反应，以将所述CD34-SG17多肽片段从肽树脂上分离；

f-2）反应后过滤掉树脂，并通过减压蒸馏出去所述清除剂；

f-3）将所述CD34-SG17多肽片段用水溶解后，用萃取液萃取，得到CD34-SG17多肽化合物粗品。

根据本发明的一个实施例，所述清除剂为1，2-乙二硫醇（EDT）、硫代苯甲醚和水的混合溶液，步骤f-1）的反应时间为3h。

根据本发明的一个实施例，所述萃取液为乙醚。

根据本发明的一个实施例，还包括步骤：g）采用高效液相色谱将所述CD34-SG17多肽化合物粗品分离纯化，得到CD34-SG17多肽片段。

本发明的又一个目的在于提出CD34-SG17多肽片段在制备CD34流式抗体中的应用以及CD34-SG17多肽片段在制备检测CD34流式抗体试剂盒中的应用。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：

图1是根据本发明实施例的CD34-SG17多肽的高效液相色谱分析示意图；

图2是根据本发明实施例的CD34抗体在人乳腺癌组织免疫组化染色示意图；

图3是根据本发明实施例的CD34抗体在人胃癌组织免疫组化染色示意图；

图4a、图4b和图4c分别是根据本发明实施例的抗体在抗人、大鼠CD34、小鼠CD34的表达示意图。

具体实施方式