[发明专利]广谱抗菌解淀粉芽孢杆菌菌株及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens NCPSJ7，还涉及该菌株在植物病害防治、果蔬采前采后病害的防治，以及食源性致病菌和腐败菌的预防中的应用。 

背景技术

植物病害、果蔬采前采后病害以及食源性致病菌和腐败菌引起食源性疾病是全球性的问题，造成了巨大的经济损失和身体伤害。联合国粮农组织（FAO）的统计数据表明，植物病害平均每年引起的减产损失约为总产量的10%-15%，其中由真菌引起的植物病害约占80%。同时，食源性疾病也严重影响人类健康，甚至出现群体性的食源性中毒事件。目前主要使用化学杀菌剂和防腐剂来控制植物采前采后病害以及食源性致病菌腐败菌，虽然化学杀菌剂或防腐剂能有效地减免植物病害、预防食源性疾病，但化学杀菌剂和防腐剂亦造成负面影响。化学药剂的残留威胁着人畜的健康，危害着环境。因此研究开发可替代化学杀菌剂和化学防腐剂的新方法来控制植物病害和食源性腐败菌和致病菌是目前研究的一个重要方面。 

随着人们环保意识的不断增强以及高新技术在农业及农产品流通领域中的应用，利用有益生物来控制植物病害，预防食源性疾病越来越得到广泛重视。我国对生物防治的研究始于50年代初期，科研工作者筛选出的有效菌株，大多将其拮抗代谢产物应用于生产实践。截至目前为止，国外已对部分抑菌物质完成实验室研究并已研发出生物制剂投入到实际生产应用当中，如我国目前允许添加到食品的乳酸链球菌素、纳他霉素等。由于生物防治高效、环保，且不会引起病原物抗药性等特点，因此研究者越来越重视利用生物防治和生物防腐这一高效方法来控制植物病害和进行农产品防腐保鲜，生物防治和生物防腐保鲜制剂的研制和开发具有广阔空间。 

芽孢杆菌是土壤微生物系统中的优势生物种群，能够产生耐热、耐旱、抗紫外、抗有机溶剂的孢子，因此可以作为理想的生防菌株。目前研究者已将部分优良的拮抗芽孢杆菌应用于植物病害的生物防治中，并取得显著的成效。因此研究开发安全的广谱拮抗芽孢杆菌具有广阔的应用空间。 

发明内容

本发明的目的是提供一种具有广谱抗菌活性的解淀粉芽孢杆菌及其应用，其菌体和发酵液具有较强的广谱抗植物病原真菌、食源性致病菌和腐败菌的预防中的应用。 

本发明涉及解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens NCPSJ7应用于植物病害和果蔬采前采后病害的防治，以及食源性致病菌和腐败菌的预防，具体的说是一种具有拮抗桃根霉腐烂病、黄瓜枯萎病、番茄灰霉病、枣炭疽病、、梨黑斑病、梨青霉病、苹果褐腐病、苹果斑点落叶病、西瓜枯萎病等植物病原真菌和金黄色葡萄球菌、甲型副伤寒沙门氏菌、副溶血性弧菌、酵母等食源性致病菌和腐败菌的解淀粉芽孢杆菌。 

一种广谱抗菌解淀粉芽孢杆菌，系从中国山东省莱芜市生姜大田中采集的土壤中分离得到，保藏于中国典型培养物保藏中心；保藏单位地址：武汉市武汉大学；保藏日期为2013年3月22日；保藏编号：CCTCC NO：M 2013098，该菌命名为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens NCPSJ7。 

本发明的解淀粉芽孢杆菌培养条件简单，在大多数培养基上生长良好，于牛肉膏蛋白胨琼脂平板生长时为菌落直径0.5-1.0mm、圆形、凸起、边缘整齐、表面光滑有光泽、乳白色、不透明的酪样菌落。通过显微镜观察，该菌大小为（0.66-0.95）μm ×（2.34-2.89）μm，革兰氏阳性杆菌，单个或成对排列，有芽孢，芽孢中生，椭圆形。营养肉汤液体静置培养表面产生菌膜，液体澄清无浑浊无沉淀，为严格好氧菌，厌氧条件不能生长。发酵葡萄糖产酸，淀粉水解和接触酶阳性，能耐受2%和5%的盐，在氯化钠浓度7%和10%的培养基上不生长。 

通过16S rDNA同源性分析，以该菌株的基因组DNA为模版扩增其16S rDNA序列，PCR产物为单一条带，回收纯化后，进行DNA测序。该菌株的16S rDNA序列长度为1400bp，将该菌株的16S rDNA序列提交到GenBank数据库，获得序列号GenBank NO. KC790453。同时将该菌株的16S rDNA序列与GenBank数据库收录的代表菌株的16S rDNA基因核苷酸序列进行同源性比对。结果与NC 016784.1等解淀粉芽孢杆菌的同源性高达99%。下表为与GenBank数据库中部分解淀粉芽孢杆菌16S rDNA的相似性比对结果： 

表1 与GenBank数据库中部分解淀粉芽孢杆菌16S rDNA的相似性比对结果