[发明专利]一种粪链球菌和酵母菌共生培养的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种微生物共生培养的方法，具体地涉及一种兼性厌氧粪链球菌和酵母菌共生培养的方法。

背景技术

粪链球菌作为一株优良的益生素菌株，它经过系列工艺制成的微生物制剂，直接饲喂畜禽后，有利于改善畜禽胃肠道内的微生物结构，竞争性排斥胃肠道内病原性微生物，维持其微生态平衡，增强消化功能，促进畜禽的营养吸收与健康发育，提高机体免疫能力，保证畜禽充分发挥生长的遗传优势，间接提高生产能力。这在国外许多地区的畜禽饲料中已经普遍使用。

酵母（Yeast）属于真菌，不是人和动物肠道的固有菌，但可以产生多种消化酶类，可以在消化道内代谢。作为益生素使用的酵母则是以活细胞的形式，通常为酵母培养物（Yeast Culture，YC）。酵母培养物中含丰富的蛋白质，氨基酸以及多种维生素，尤其是B族维生素以及各种消化酶类，在饲料工业中酵母菌主要作为蛋白饲料使用。酵母发酵饲料能促进微生物繁殖，提高消化率，促进增重，提高饲料报酬。酵母越来越被广泛用于优质蛋白质饲料的生产。

由于粪链球菌兼性厌氧而较难培养，再加上粪链球菌产酸能力比较强，在其生长过程中能够产生乳酸，随着乳酸含量逐渐积累增多，导致pH值下降。酸度过大影响菌种自身的生长，发酵液的菌数较少。

发明内容

本发明是以获得高数量活菌为目的，提供一种成本低、作用效果稳定的，将粪链球菌与酵母菌株共生培养的方法，发挥两菌株间的协同作用，促进两株菌共同生长，达到比单一菌的益生菌制剂能发挥更好的作用。

本发明中酵母菌是好氧型真菌，粪链球菌是兼性厌氧型细菌，为了达到共生培养及获得高数量的混合菌，发明人从两种菌株各自生长繁殖的特点出发，设计接种量、初始pH、菌株添加顺序、振荡转速以及培养时间，以促进它们共生培养。具体方法为：酵母菌和粪链球菌种子液的接种量分别为2.5%和1.0%，初始pH 为7.0，先将粪链球菌种子液接种到培养基中培养4h后，再添加酵母菌种子液，于30℃，振荡转速为180-240rpm ，培养20h。

酵母菌和粪链球菌复合培养效果的好坏与培养基的组成成分有着紧密的联系，针对两株菌生长特点，通过正交设计方法，对复合菌培养基进行优化，优选的最佳培养基的配方为：每1000ml培养基中，含有蛋白胨24g、葡萄糖12-24g、酵母粉5-10g。

本发明的有益效果是：本发明通过设计的培养方法和优选的培养基，通过粪链球菌和酵母菌的协同效应，降低了发酵成本和时间，维持了稳定的培养液pH值范围，提高了活菌数量，更好地发挥了复合菌剂的作用效果。

附图说明

图1是本发明的方法混合菌不同接种量与培养菌量图。

图2是本发明的方法混合菌在不同初始pH的液体培养的菌量图。

图3是本发明的方法混合菌共生与单独培养过程中菌液pH的变化图。

图4是本发明的方法不同振荡转速下混合菌生长量图。

图5是本发明的方法不同培养时间的混合菌菌量图。

图6是本发明的方法混合菌在5L发酵罐扩大培养菌量与pH的变化图。

具体实施方式

实施例1  混合菌不同接种量与培养菌量的关系

（一）培养基的配方为：每1000ml培养基中，含有蛋白胨24g、葡萄糖18g、酵母粉8g。

（二）方法：分别按酿酒酵母菌种子液的接种量为2%、2.5%、3%、3.5%；分别按粪链球菌种子液的接种量为0.5%、1.0%、1.5%、2.0%；初始pH 为7.0，先将粪链球菌种子液接种到培养基中培养4h后，再添加酿酒酵母菌种子液，于30℃，振荡转速为180rpm，培养20h。结果见图1。

酿酒酵母菌和粪链球菌分别属于真菌和细菌，单个酵母细胞的大小要远远大于单个粪链球菌细胞，所以酵母菌对于营养物质的消耗以及产生代谢产物的数量也远远大于粪链球菌。由于不同种间菌株在同一空间内共生培养，互相争夺营养物质，产生抑制对方生长的代谢产物。通过调节接种量与添加方式可以减少它们之间的相互作用，来获得高数量的复合菌株。从图1可见，当酿酒酵母菌和粪链球菌种子液接种量分别为2.5%和1.0%时，粪链球菌的活菌数量最高，因此本发明接种量优选为，酿酒酵母菌2.5%和粪链球菌1.0%。

实施例2   混合菌在不同初始pH的液体培养的菌量

（一）培养基的配方为：每1000ml培养基中，含有蛋白胨24g、葡萄糖18g、酵母粉8g。