[发明专利]减毒肠毒素C2超抗原突变蛋白及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201310078783.0 | 申请日： | 2008-09-19 |
| 公开（公告）号： | CN103214562A | 公开（公告）日： | 2013-07-24 |
| 发明（设计）人： | 王小刚;徐明恺;张惠文;刘昌孝;陈艳;陈巨余 | 申请（专利权）人： | 沈阳协合集团有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/31 | 分类号： | C07K14/31;C12N15/31;C12N15/70;A61K39/085;A61P35/00;A61P1/12;A61P1/08;C12R1/445 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 周秀梅;李颖 |
| 地址： | 110179 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 减毒肠 毒素 c2 抗原 突变 蛋白 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种减毒肠毒素C2超抗原突变蛋白，其特征在于：所述减毒肠毒素C2超抗原突变蛋白具有序列表SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15中碱基序列。
2.一种权利要求1所述的减毒肠毒素C2超抗原突变蛋白，其特征在于：所述减毒肠毒素C2超抗原突变编码蛋白具有序列表SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:16中氨基酸序列。
3.一种按权利要求1所述的减毒肠毒素C2超抗原突变蛋白的制备方法，其特征在于：
以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板，采用引物对sec2-F:5’-CGGAATTCGAGAGTCAACCAGA-3’和sec2(H118A)-R:5’-GGTTTCCTTCAGCTTTTGTTATTCC3’;sec2(H118A)-F:5’-GGAATAACAAAAGCTGAAGGAAAC CAC-3’和sec2-R:5’-TCGCTCGAGTTATCCATTCTTTGTTG-3’分别扩增获得突变位点左侧和右侧的重叠PCR产物，然后以sec2-F和sec2-R为引物，采用上述获得突变位点左侧和右侧的重叠PCR产物为模板进行PCR扩增扩得具有序列表SEQ ID NO:7中碱基序列sec2(H118A)突变基因；
以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板，采用引物对sec2-F:5’CGGAATTCGAGAGTCAACCAGA-3’和sec2(H122A)-R:5’-CCATTATCAAAGGCGTTTCCTTC-3’;sec2(H122A)-F:5’-GGAAACgCCTTTGATAATGGGAAC-3’和sec2-R:5’-TCGCTCGAGTTATCCATTCTTTGTTG-3’分别扩增获得突变位点左侧和右侧的重叠PCR产物，然后以sec2-F和sec2-R为引物，采用上述获得突变位点左侧和右侧的重叠PCR产物为模板进行PCR扩增扩得具有序列表SEQ IDNO:11中碱基序列sec2(H122A)突变基因；
以SEQ ID NO:7中碱基序列sec2(H118A)突变基因为模板，采用引物对sec2-F:5’-CGGAA TTCGAGAGTCAACCAGA-3’和sec2(H118A/H122A)-R:5’-CCATTATCAAAGGCG TTTCCTTC-3’;sec2(H118A/H122A)-F:5’-GGAAACGCCTTTGATAATGGGAAC-3’和sec2-R:5’-TCGCTCGAGTTATCCATTCTTTGTTG-3’分别扩增获得突变位点左侧和右侧的重叠PCR产物，然后以sec2-F和sec2-R为引物，采用上述获得突变位点左侧和右侧的重叠PCR产物为模板进行PCR扩增扩得具有序列表SEQ IDNO:13中碱基序列sec2(H118A/H122A)突变基因；
以序列表SEQ ID NO:13中碱基序列sec2(H118A/H122A)突变基因为模板，采用引物对sec2-F:5’-CGGAATTCGAGAGTCAACCAGA-3’和sec2(H47A)-R:5’-GTTATAAATTAAATCT GCTGCCAAA-3’;sec2(H47A)-F:5’-TTTGGCAGCAGATTTAATTTATAAC-3’和sec2-R:5’-TCGCTCGAGTTATCCATTCTTTGTTG-3’分别扩增获得突变位点左侧和右侧的重叠PCR产物，然后以sec2-F和sec2-R为引物，采用上述获得突变位点左侧和右侧的重叠PCR产物为模板进行PCR扩增扩得具有序列表SEQ IDNO:15中碱基序列sec2(H47A/H118A/H122A)突变基因；
而后将具有序列表SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQID NO:15中碱基序列中的碱基序列分别克隆入表达载体pET-28a，以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌，分别构建成异源表达减毒肠毒素C2突变蛋白的基因工程菌，经诱导后在培养基中异源表达得具有序列表SEQ ID NO:8、SEQID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16中氨基酸序列中的碱基序列的减毒肠毒素C2超抗原突变蛋白。
4.按权利要求3减毒肠毒素C2超抗原突变蛋白的制备方法，其特征在于：所述的诱导方法是通过以IPTG为诱导物进行诱导表达。
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