[发明专利]一种核酸检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术应用领域，具体涉及核酸检测方法。

背景技术

1.核酸检测的意义

细菌、病毒及其他病原微生物均具有独特的核酸序列，这些特定序列的检测在食品安全、疾病诊断、环境监测等领域起着至关重要的作用。

1.1食品安全

食品和水与空气一样是人类生活的必需品，是人类生命的能源。然而，在食品生产、加工、储存、运输和销售的各个环节中，微生物的大量繁殖会引起食品腐败变质，导致食源性感染或食物中毒。随着近年来环境污染的不断加剧，病原微生物对人类所造成的威胁越来越大，尤其是近年来世界各国相继发生的重大食品安全事件，给食品安全敲响了警钟。作为微生物分类和鉴定的重要依据之一，传统的形态学和生理生化方法操作繁琐，需要时间较长，其准备和收尾工作繁重，且需要大量专业技术人员参与。核酸检测技术可特异性识别病原体中的保守核酸序列，已被用于检测大肠杆菌、痢疾杆菌等食物中常见的病原体。

1.2疾病诊断

分子生物学研究表明基因中核酸序列的微小变化可能导致诸如癌症、心脑血管疾病、遗传性疾病等一系列疾病，致病基因的改变通常发生在病变的早期，因此有可能根据核酸的改变来早期诊断疾病。此外，由于被细菌或病毒感染者携带有细菌或病毒的基因，通过分析个体中细菌或病毒特异的核酸，可诊断传染性疾病，如肺结核、艾滋病等。而这些疾病的检测，对于传染疾病的控制与预防具有重大意义。

1.3环境监测

随着我国社会经济的发展，环境问题日益突出。环境污染问题不仅影响我国人民的生存环境和生存质量，危害人民的身体健康，同时也制约着我国经济的发展。因此，加强环境保护工作显得越来越重要。环境监测是环境保护工作的基础，环境监测数据是环境管理与决策的基本依据。可以说，离开了环境监测工作的支持，整个环保工作都将陷入被动的局面。核酸检测可准确检测环境中的有害生物，如水样中的霍乱弧菌，空气中的产气荚膜杆菌以及海洋中的已知病菌和有害生物（如某些藻类）等。这对于预防和控制赤潮、水质污染、大气污染等重大环境问题具有重要意义。

2.核酸检测的方法

发展简易、快速、低成本、可重复利用的核酸检测方法对于以上应用具有重要意义，也是目前核酸检测的发展方向的主要趋势。

目前常用的核酸检测方法主要包括电泳法，紫外分光光度法以及荧光法。前两者主要用于终点检测，而荧光法用于实时检测，较前两者对仪器的要求和成本要高。而电泳法操作较繁琐，耗时也长，因而主要用于实验室；紫外分光光度虽然操作简单，耗时也短，但对样品纯度要求较高，易受杂质干扰。因而世界各地都在积极研发简易、快速而低廉的核酸检测方法，其中试纸法不仅完全满足上述要求，而且灵敏度高，特异性好，最近几年倍受专家学者关注；但其中一个突出的问题就是其制备还依赖于昂贵而精密的仪器加工，并且一般只能一次性使用，因而对于一般家庭卫生保健以及长期跟踪，还需要进一步改进和提高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够实现简易、快速、低成本、并且可重复利用的核酸检测方法。

为达到上述目的，本发明采用了以下技术方案。

1）确定检测所需的特异性核酸目标片段，然后制备捕获溶液、检测溶液以及对照溶液，所述捕获溶液含有与特异性核酸目标片段的一端互补的捕获探针，捕获探针上连接有显色颗粒，检测溶液含有与特异性核酸目标片段的另一端互补的检测探针，对照溶液中含有与捕获探针互补的对照探针，检测探针以及对照探针上连接有用于与试纸结合的分子；

2）将捕获溶液、检测溶液和对照溶液分别注入三支加样笔的笔杆中，所述加样笔还包括笔头，笔头的前端开设有溶液流出孔，溶液流出孔内设置有可以转动的球珠，笔头的后端与笔杆相连通，注入捕获溶液、检测溶液或对照溶液后，用密封油将笔杆密封；

3）依次持三支加样笔在试纸上书写线条，由捕获溶液构成的线条A位于试纸的下端，由对照溶液构成的线条C位于试纸的上端，由检测溶液构成的线条B位于线条A与线条C之间；

4）待构成线条的溶液干燥后，将试纸的下端浸润于待测样品中，保持线条A位于待测样品的上方，待线条C显色并稳定后取出试纸，观察线条B的显色情况。

所述加样笔还包括用于连接笔头与笔杆的连接装置。

所述书写是指将笔头前端接触试纸，然后驱动笔头在试纸上移动，使笔头前端的球珠转动，带动笔杆内的捕获溶液、检测溶液或对照溶液流出，流出的捕获溶液、检测溶液或对照溶液涂敷于试纸上。

所述球珠的直径为100nm-1cm。