[发明专利]靶向载体-磷脂缀合物

说明书

本申请是2006年12月8日提交的题为“靶向载体-磷脂缀合物”的国家申请号为200680052279.1(PCT/US2006/061793)的发明专利申请的分案申请。

相关申请

本申请要求2006年7月25日申请的美国临时申请号60/833,342和2005年12月9日申请的美国临时申请号60/749,240的优先权和权益，所述每个临时申请的内容都通过引用结合到本文中。

技术领域

本发明涉及靶向载体-磷脂缀合物(targeting vector-phospholipid conjugate)，尤其是靶向肽-磷脂缀合物，其可用于治疗性和诊断性组合物；以及制备它们的方法。本发明包括靶向超声造影剂，尤其是包含此靶向载体-磷脂缀合物的靶向微泡。

背景技术

血管生成，即新血管的形成，不仅在胚胎发育以及正常组织生长和修复过程中发生，而且涉及雌性生殖周期、怀孕的建立和维持以及伤口和骨折的恢复。除了发生在正常个体中的血管生成之外，血管生成事件涉及许多病理过程，尤其是肿瘤生长和转移，以及其中血管增殖增加的其它病症，例如糖尿病性视网膜病、银屑病和关节病。另外，血管生成对于将肿瘤由增生转变为肿瘤生长很重要。因此，抑制血管生成已成为活跃的癌症治疗研究领域。

一般认为，肿瘤诱导的血管生成取决于肿瘤细胞产生促血管生成生长因子，该生长因子战胜了趋向于保持现有血管静止和稳定的其它力量。这些促血管生成物质或生长因子中最佳表征的是血管内皮生长因子(VEGF)(Cohen等，FASEBJ.，13：9-22(1999))。VEGF由多种细胞类型响应于低氧和某些其它刺激天然产生。许多肿瘤也产生大量的VEGF，和/或诱导邻近的基质细胞产生VEGF(Fukumura等，Cell，94：715-725(1998))。VEGF也称为VEGF-A，其作为121、145、165、189和206个氨基酸的5种不同剪接异构体(splice isoform)合成。VEGF₁₂₁和VEGF₁₆₅是产生的主要形式，尤其是在肿瘤中(参见Cohen等，1999，出处同上)。与VEGF₁₆₅不同，VEGF₁₂₁没有由VEGF基因的外显子6和7编码的基础结构域，且不结合发夹或胞外基质。在本段落中提及的每个参考文献都整体在此引入作为参考。

VEGF家族成员主要通过结合受体酪氨酸激酶起作用。一般而言，受体酪氨酸激酶为糖蛋白，具有能够结合一种或多种特异性生长因子的胞外结构域、跨膜结构域(通常为α螺旋)、近膜结构域(其中受体可通过例如磷酸化进行调节)、酪氨酸激酶结构域(受体的催化组分)以及在许多受体中涉及酪氨酸激酶底物的识别和结合的羧基末端尾。已知有3个结合VEGF的内皮细胞特异性受体酪氨酸激酶：VEGFR-1(FIt-1)、VEGFR-2(KDR或FIk-1)和VEGFR-3(Flt4)。FIt-1和KDR(也称为VEGFR-2或FIk-1，在本文可互换使用)已被鉴定为主要的高亲和力VEGF受体。尽管FIt-1对VEGF具有较高亲和力，但KDR表现出更丰富的内皮细胞表达(Bikfalvi等，J.Cell.Physiol.，149：50-59(1991))。而且，一般认为KDR支配血管生成反应，并因此引起人们极大的治疗和诊断兴趣(参见Cohen等，1999，出处同上)。KDR表达在血管生成性血管中被高度上调，尤其是在诱导强血管生成反应的肿瘤中(Veikkola等，Cancer Res.，60：203-212(2000))。在纯合KDR敲除小鼠胚胎中完全没有血管发育凸显了KDR在血管生成中的关键性作用(Folkman等，Cancer Medicine，第5版(B.C.Decker Inc.；Ontario，Canada，2000)，第132-152页)。

KDR(激酶结构域区)的成熟形式由1336个氨基酸组成。KDR的糖基化形式可在SDS-PAGE凝胶上迁移，其表观分子量约为205kDa。KDR在其胞外结构域中含有7个免疫球蛋白样结构域，其中前3个在VEGF结合中最重要(Cohen等，1999，出处同上)。VEGF自身为能够同时结合2个KDR分子的同二聚体。结果为2个KDR分子在结合和自身磷酸化时被二聚化，变得活性增加很多。增加的激酶活性又启动了介导VEGF的KDR特异性生物作用的信号转导途径。