[发明专利]伊犁马育种方法及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及动物分子生物学和育种领域，具体的说，涉及一种提高伊犁马体尺性状的育种方法及其试剂盒。

背景技术

马肉质味极佳，越来越受到消费者青睐，价格平稳上扬。近年来，随着人们对马肉理化特性和营养价值进一步认识，逐渐明确了它们所具有的特殊作用。马肉瘦肉多、脂肪少，含较多的不饱和脂肪酸，这种不饱和脂肪酸能抵消饱和脂肪酸促使血管中胆固醇沉积的有害过程等优点，马肉中胆固醇含量低，每100g可食肉中胆固醇含量仅为10.4-31.9mg，因此有很好的防止动脉血管粥样硬化的作用。国内马肉消费主要集中在新疆、内蒙等喜食马肉的少数民族聚集区，马肉市场销售量逐年上升。新疆马肉产量2000年3.57万吨，2008年达到4.8万吨。目前，国内马肉的产量已经无法满足消费者日益增长的需求。同时在国际市场上也成为热销商品，因此发展肉用养马业势在必行。伊犁昭苏马场近年来从国外和东北引进了大量的大型阿尔登马对当地的伊犁马进行杂交改良，进行肉用马新类型的培育。但是马作为大家畜，其世代间隔长，且马的主要经济性状的遗传力低，用传统的育种方法很难获得较为显著的遗传进展。要在常规的杂交和选优交配培育马的基础上，需要筛选与马的肉用性能密切相关的DNA标记，利用分子标记辅助选择技术，实现早期选种和选种的准确性，加速伊犁马肉用新类群的培育工作。

生长发育性状，屠宰性能和肉品质是评价马肉用性能的主要指标。马的体尺性状的准确测定能够评估生长发育性状，因此我们通过鉴定与马的体尺性状相关的SNP标记，进行肉用马的标记辅助选择，加速伊犁马肉用新类群的培育工作。

发明内容

本发明的目的是提供一种伊犁马的育种方法和试剂盒，通过检测与伊犁马肉用新类群体尺性状相关的SNP标记，该位点位于如SEQ ID NO.1所示的170bp处，通过分子生物学技术检测该标记，利用该标记辅助选择有利的个体留种，以显著提高伊犁马肉用新类群的体尺性状，即体高，体长，胸围和管围，加速伊犁马肉用新类群的培育。

本发明一方面涉及一种伊犁马的育种方法，其特征在于包括如下步骤：提取伊犁马父本和/或母本血液中的DNA，针对SEQ ID NO.1中170bp处的SNP多态性位点，根据SEQ IDNO.1序列分别在其160bp上游、180bp下游设计适合的、与其核苷酸互补的正向、反向引物，采用正反向引物进行扩增，扩增产物使用Alu I限制性内切酶进行酶切，酶切产物使用凝胶电泳进行检测，选择在凝胶电泳中出现2或者3条条带的父本和/或母本作为育种的父本和/或母本。

在本发明的一个优选实施方式中，其特征在于上游正向引物为：5’-TGGAGTCAGTTGGGTTTAATG-3’和/或下游的反向引物5’-GACCGGATAGCATAGAGAGAG-3’，选择在凝胶电泳中284bp，169bp，115bp附近有2或者3条条带的父本和/或母本作为育种的父本和/或母本。

在本发明的另一个优选实施方式中，其特征在于选择在284bp，169bp，115bp附近仅有2条条带的父本和/或母本作为育种的父本和/或母本，优选的，所述的条带位于169bp和115bp附近。

在本发明的另一个优选实施方式中，其特征在于还包括针对所培育的子代进行相同的筛选步骤。

本发明另一方面还涉及一种伊犁马育种的试剂盒，其特征在于包括正向引物F：5’-TGGAGTCAGTTGGGTTTAATG-3’、反向引物R：5’-GACCGGATAGCATAGAGAGAG-3’、Alu I限制性内切酶，任选的，包括PCR和/或凝胶电泳所需要的其它试剂。

本发明还涉及上述试剂盒在提高伊犁马体高和/或体长和/或胸围和/或管围中的应用。

采用本发明的方法和试剂盒能够显著提高伊犁马肉用新类群的体尺性状，即体高，体长，胸围和管围，加速伊犁马肉用新类群的培育。

具体实施方式：

1.与伊犁马体尺性状相关的SNP的获得

(1)伊犁马基因组DNA的提取

采集伊犁马血液，使用肝素纳抗凝，采取天根血液基因组试剂盒提取伊犁马基因组DNA，0.8％琼脂糖凝胶电泳检测，核酸蛋白定量仪测定其浓度和纯度，稀释至50ng/ul，保存备用。(2)目的片段的扩增