[发明专利]产L-精氨酸的基因工程菌的构建方法及其用途

权利要求书

1.一种生产L-精氨酸的基因工程菌株，其特征在于，该菌株为用重组基因工程质粒pXMJ19-argH转化的营养缺陷型黄色短杆菌AN78(p-argH)。

2.如权利要求1所述的基因工程菌株，其特征在于，其中大肠杆菌选自BL21、DH5α，营养缺陷型黄色短杆菌AN78、谷氨酸棒杆菌 ATCC 13032之一。

3.如权利要求1所述的基因工程菌株，其特征在于，重组基因工程质粒pXMJ19-argH含有谷氨酸棒杆菌 ATCC 13032中的精氨酸琥珀酸酶基因核苷酸序列。

4.如权利要求1-3 中任一权利要求所述的基因工程菌株的构建方法，包括下列步骤：

a）以谷氨酸棒杆菌ATCC 13032的基因组为模板，PCR扩增获得编码精氨酸琥珀酸酶基因argH，利用穿梭质粒pXMJ19表达载体构建重组质粒p XMJ19-argH；

b）将pXMJ19-argH转化导入大肠杆菌DH5α和BL21中，鉴定重组质粒的正确性；

c）再将重组质粒pXMJ19-agH转化导入营养缺陷型黄色短杆菌AN78中，鉴定重组质粒的正确性以及含有重组质粒的黄色短杆菌AN78中质粒遗传的稳定性。

5.如权利要求1-4所述的任一权利要求所述基因工程菌主要用于生产L-精氨酸。

6.如权利要求1-5所述的基因工程菌构建方法，其特征在于，其中PCR扩增编码精氨酸琥珀酸酶基因argH所用的引物为：

P2：5′-CGCGGATCCTTATCGACGTACCCCCGC-3′ BamH I27bp

P3：5′-CGCGAATTCATGGAACAGCACGGAACC3′ EcoR I27bp。

7.如权利要求1-4中任一权利要求所述基因工程菌株主要用于生产L-精氨酸。

8.用权利要求1-4中任一权利要求所述基因工程菌株生产L-精氨酸方法，包括下列步骤：

a）其出发菌株为权利要求1-4中任一权利要求所述黄色短杆菌AN78基因工程菌株；

b）摇瓶培养发酵：摇床转速为100-300转/分钟，温度为30℃，培养时间3-4天。