[发明专利]产电基因工程菌的构建、菌株及其应用

权利要求书

1.一株产电基因工程菌菌株，分类命名为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）PAO1-phzM，已保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号：CCTCC NO：M 2013001。

2.权利要求1所述产电基因工程菌菌株的构建方法，其特征在于：以铜绿假单胞菌PAO1菌株为宿主菌，将甲基转移酶基因phzM插入pBBR1MCS-5载体的EcoRI和SpeI酶切位点之间，再将重组质粒导入表达宿主中，获得产电基因工程菌；具体步骤如下：

1）以铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）PAO1基因组为模板，PCR扩增出phzM基因，连接到测序载体PMD19-T Simple载体，经测序与Genebank上公布的序列比对完全正确后，设计酶切位点EcoRI和SpeI，用限制性内切酶EcoRI和SpeI双酶切phzM基因片段和pBBR1MCS-5载体后连接得到重组质粒pBBR1MCS-5-phzM；

2）将构建好的重组质粒pBBR1MCS-5-phzM转化至DH5α感受态细胞，得到重组大肠杆菌DH5α-pBBR1MCS-5-phzM，选取阳性克隆；

3）将鉴定后的阳性克隆的质粒电击转化导入到铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）PAO1的感受态细胞中，经50 μg/mL的庆大霉素筛选得到基因工程菌PAO1-phzM。

3.权利要求1所述产电基因工程菌菌株在微生物燃料电池中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于包括如下步骤：

1）菌种活化：将产电基因工程菌PAO1-phzM接种到含有50μg/ml庆大霉素的LB平板上，培养过夜，挑取平板上长出的单菌落到5ml LB培养基中，37℃，200rpm培养过夜；

2）诱导培养：将活化的菌液按照体积比2%的接种量接入LB培养基中，37℃，200rpm，有氧培养菌体OD₆₀₀至3.7时加入1.34mM的IPTG继续诱导培养10h；

3）产电：将诱导培养后的菌液与PBS、葡萄糖混合成阳极液接入电池中，其中阳极液的配比：菌液25ml，10 g/L葡萄糖20ml，50mmol PBS缓冲液5ml。