[发明专利]人类免疫缺陷病毒1型一步法荧光定量PCR检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属生物技术领域，涉及一种生物检测技术，尤其涉及一种用于人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）RNA荧光定量检测试剂盒。

背景技术

人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒（Lentivirus），属反转录病毒（Retrovirus）的一种。该病毒破坏人体的免疫功能，导致免疫系统的失去抵抗力，从而导致各种疾病病原体得以在人体内生存，发展到最后，导致艾滋病（即获得性免疫缺陷综合征，Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS），为一种至今无有效疗法的致命性传染病。自1981年在美国首次发现和确认以来，艾滋病已夺取超过3000万人的性命，使它成为史上最具破坏力的全球性流行病之一，截至2011年5月底世界上约有6400万人感染艾滋病毒，每天平均有7000宗新病例。目前，南亚和东南亚成为继撒哈拉以南非洲之后的第二重灾区。中国CDC估计，截止至2011年底，我国存活HIV携带者及艾滋病患者约78万人，全年新发感染者4.8万人，死亡2.8万人。疫情已覆盖全国所有省、自治区、直辖市，目前我国面临艾滋病发病和死亡的高峰期，且已由吸毒、暗娼等高危人群开始向一般人群扩散，防艾、抗艾形势严峻。

HIV感染后病毒载量的变化与疾病的进程有密切的相关性，HIV病毒载量的检测可以预测疾病发生、发展以及预后，因此，HIV病毒载量的检测可以监控疾病的发展过程，并为制定相应的治疗方案和策略提供依据；而且病毒载量较高的孕妇造成母婴传播的危险性较大，可根据病毒载量确定孕妇是否需服用抗病毒药物来减少HIV的母婴传播。抗HIV病毒药物的作用主要是抑制病毒的复制，降低病毒载量。因此，病毒载量的检测对疾病的监控、预防母婴传播以及观察抗病毒药物的疗效都具有重要的意义。

根据基因差异，可将HIV分为HIV-1型和HIV-2型。一般，HIV-1病毒是绝大多数HIV感染的病原体，HIV-2病毒主要出现在非洲，尤其是在西非地区。HIV-2的传播方式与HIV-1相同，都会发生机会性感染和AIDS，但HIV-2所致的免疫缺陷发展得较为缓慢和温和。不同地区流行的亚型不同，同一亚型在不同地区的流行态势也存在一定差异。目前，世界范围内流行的主要为HIV-1型。在美国，因为HIV-2较为少见，所以HIV-2未被列为常规检测。中国境内流行的HIV主要为M组HIV-1型（目前境内尚未见HIV-1 N组和O组的报道，HIV-2型感染病例的报道极少），其基因型主要为B/B’、BC重组型（包括CRF 07_BC重组型和CRF 08_BC重组型）以及AE重组型（CRF 01_AE重组型）。而且，HIV-1基因型具有一定的地域差异，不同的地区流行的HIV基因型也不尽相同，如CRF 07_BC重组型流行于四川、新疆等地，而CRF 08_BC重组型则流行于广西等地。

目前，HIV的检测方总体可分为抗体检测和病毒检测两大类。病毒检测包括细胞培养（病毒分离）、p24抗原检测和病毒核酸检测。早期对HIV的诊断主要是通过血清学试验检测抗HIV的抗体，间接地诊断HIV感染。近几年，分子生物学方法不断被应用到HIV的检测中，HIV的实验室诊断方法取得了很大的进展，核酸检测已经成为了HIV实验室诊断的发展方向。

传统的核酸检测方法是采用核酸杂交技术对目的核酸进行检测，虽然采用放射性标记的探针可以提高检测的敏感性，但仍然偏低，不能满足临床需要。最近几年核酸检测技术发展迅速，主要是采用各种扩增放大技术提高检测的灵敏度。随着扩增技术的成熟，可以将低拷贝的靶序列成对数级放大扩增，同时采用比放射性探针更灵敏的非放射性检测系统（如电化学发光系统等），明显提高核酸检测的灵敏度，并减少放射性物质的污染。检测HIV-1 RNA病毒载量的方法主要有分支DNA检测（bDNA）、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和核酸序列扩增检测（NASBA）等，其中，基于TaqMan探针技术的荧光定量RT-PCR方法已发展成为成熟、常用而有效的检测手段。