[发明专利]一种低蛋黄胆固醇含量蛋鸡的培育方法

权利要求书

1.一种低蛋黄胆固醇含量蛋鸡的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）提取样本鸡DNA，以包含鸡VLDLR基因的DNA序列为模板，设计一对引物，利用PCR-RFLP方法进行样本鸡个体基因分型；PCR-RFLP酶切片段是一个片段，片段大小为293bp，命名为TT型；PCR-RFLP酶切片段是两个片段，片段大小分别为214bp和79bp，命名为CC型；PCR-RFLP酶切片段是三个片段，片段大小分别为293bp、214bp和79bp，命名为CT型；

2）利用基因效应分析模型，将不同基因型与样本鸡个体蛋黄胆固醇含量及全蛋胆固醇含量进行关联分析，比较不同基因型的蛋黄胆固醇含量，确定选留基因型；

3）将符合选留基因型的公母鸡个体组建家系，繁殖下一代；

4）提取选留家系鸡后代的DNA，以步骤1）中的一对引物进行PCR-RFLP分析，选留其中为步骤2）中选留基因型的鸡；

5）重复步骤3）和4）继代选育至少三代，得到低蛋黄胆固醇含量蛋鸡。

2.根据权利要求1所述的一种低蛋黄胆固醇含量蛋鸡的培育方法，其特征在于，所述引物为：

正向引物：5'-CTCGCTGAGGCTCGTGTT-3′；

反向引物：5'-GAAATGGTATGCCGAAGT-3′。

3.根据权利要求1所述的一种低蛋黄胆固醇含量蛋鸡的培育方法，其特征在于，所述PCR反应体系为：超纯水3.5μL，10pmol/μL的上游引物0.5μL，10pmol/μL的下游引物0.5μL，50ng/μL DNA模板0.5μL，2×Taq Master Mix5.0μL，反应总体积10μL。

4.根据权利要求1所述的一种低蛋黄胆固醇含量蛋鸡的培育方法，其特征在于，所述PCR反应程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，最后72℃充分延伸10min，4℃保存，其中变性、退火、延伸共30个循环。

5.根据权利要求1所述的一种低蛋黄胆固醇含量蛋鸡的培育方法，其特征在于，所述PCR-RFLP酶切体系为：Eco72I内切酶0.3μL，10×PCR Buffer2μL，PCR产物10μL，超纯水7.7μL，反应总体积20μL。

6.根据权利要求1所述的一种低蛋黄胆固醇含量蛋鸡的培育方法，其特征在于，所述基因效应分析模型：Y=μ+G+E，其中：Y为蛋品质测定的观察值；μ为群体平均值；G为基因型固定效应；E为随机误差。

7.根据权利要求1所述的一种低蛋黄胆固醇含量蛋鸡的培育方法，其特征在于，所述选留基因型为TT型。

8.根据权利要求1所述的一种低蛋黄胆固醇含量蛋鸡的培育方法，其特征在于，所述步骤3）的具体方法为：采用闭锁群选育法进行纯系选育，组建家系50个，公母比例1:10，个体笼饲养至40周龄，记录每只母鸡的产蛋数，40周龄时的平均蛋重和蛋黄胆固醇含量，计算50个家系全部母鸡和每个家系母鸡的产蛋数、蛋重和蛋黄胆固醇含量3个性状的均值；以蛋黄胆固醇含量为主选性状，兼顾蛋重和产蛋数，选留蛋黄胆固醇含量低于50个家系全部母鸡均值，蛋重和产蛋量高于50个家系全部母鸡均值的前15个家系，繁殖下一代。