[发明专利]一种从透明质酸钠发酵液中快速制备透明质酸钠的方法

说明书

技术领域

本发明涉及透明质酸钠的制备方法，尤其涉及从透明质酸钠发酵液中分离提取透明质酸钠的方法。

背景技术

透明质酸(Hyaluronic Acid，HA)是由β-D-葡萄糖醛酸和N-乙酰胺基葡萄糖通过β，1-3和β，1-4糖苷键所构成的重复单元而形成的线性高分子粘多糖，双糖单位数为300-1100，分子量范围10⁵-10⁷Da。

自从本世纪30年代Mayer首次从动物眼玻璃体中提取得到HA后，HA的生产和应用研究至今已有70余年的历史。HA有独特的粘弹性和生理功能，是细胞外基质的主要成分，具有保水、润滑、调节渗透压等作用，可以保护正常细胞免受细胞毒性、自由基等的侵袭，并可影响细胞增生、分化等。因此，HA广泛用于骨科、眼科、妇科、手术外科后防粘连、整形美容及保健食品等领域。

目前大都采用发酵法来生产HA，由于发酵液中含有菌体、蛋白质以及核酸等物质，从发酵液后总提取HA的方法各种各样，但是不外乎是用CPC或者乙醇进行沉淀，这必然设计到粗品复溶过程，而此过程费时费力，增加了生产成本，并不利于大规模生产。

发明内容

本发明旨在克服现有技术中存在乙醇沉淀物或者CPC沉淀物复溶这一费时费力的步骤的不足，提供了一种从发酵液直接获得粉末状透明质酸钠的方法，该方法耗时少，成本低，所得的粉末状HA纯度高、蛋白含量低。

为了实现本发明目的，本发明的一种从透明质酸钠发酵液中快速制备透明质酸钠的方法，其是将含有透明质酸钠的发酵液升温除菌后过滤除菌体，滤液稀释后加入活性炭进行吸附，然后用树脂脱色除蛋白，然后加入乙醇进行沉淀，脱水固化干燥后得到粉末状透明质酸钠固体。具体的，本发明用一下的技术方法来实现，具体步骤：

1)将透明质酸钠发酵液快速升温至100℃-121℃，维持10-30分钟，然后板框压滤；

2)滤液用2-4倍的纯化水稀释后，加入1％-5％活性炭吸附1-5个小时后，板框压滤；

3)滤液用树脂吸附1-2小时，吸附液按比例加入0.4mol/L的氯化钠；

4)用2-3倍乙醇沉淀透明质酸钠，洗涤固化干燥后得到粉末状透明质酸钠。

采用简单的四步方法，就可以得到粉末状的HA，且HA得率约为90％，避免复杂的设备不利于放大或增加生产成本，无须繁琐的步骤使HA得率降低，并且节省了复溶的时间，大大缩减了从发酵液到粉末状HA的生产时间，从而更加利于工业化放大生产透明质酸。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

1)取1000ml发酵液，含HA4g，分子量为2.26MDa。

2)发酵液升温至100℃，维持20分钟，过滤，得滤液。

3)滤液用纯化水稀释至3000ml，加入活性炭20g/L和硅藻土2g/L，搅拌吸附4hr，过滤，得滤液。

4)滤液中加入D113树脂500g，搅拌吸附1小时后，滤掉树脂，得滤液。

5)滤液加入氯化钠使其终浓度为0.4mol/L，用2-3倍乙醇沉淀HA，然后洗涤固化干燥得粉末状HA。

整个过程耗时8小时，所得HA干粉为3.8g，葡萄糖醛酸纯度约43.6％，分子量为1.67MDa，蛋白/HA(g/g)＝0.08％。

实施例2

1)取1000ml发酵液，含HA4g，分子量为2.26MDa。

2)发酵液升温至121℃，维持10分钟，过滤，得滤液。

3)滤液用纯化水稀释至4000ml，加入活性炭50g/L和硅藻土2g/L，搅拌吸附2hr，过滤，得滤液。

4)滤液中加入D113树脂500g，搅拌吸附2小时后，滤掉树脂，得滤液。

5)滤液加入氯化钠使其终浓度为0.4mol/L，用2-3倍乙醇沉淀HA，然后洗涤固化干燥得粉末状HA。

整个过程耗时7小时，所得HA干粉为3.6g，葡萄糖醛酸纯度约44.5％，分子量为1.76MDa，蛋白/HA(g/g)＝0.06％。

实施例3

1)取1000ml发酵液，含HA4g，分子量为2.26MDa。

2)发酵液升温至110℃，维持15分钟，过滤，得滤液。

3)滤液用纯化水稀释至3000ml，加入活性炭40g/L和硅藻土2g/L，搅拌吸附5hr，过滤，得滤液。

4)滤液中加入D113树脂500g，搅拌吸附1小时后，滤掉树脂，得滤液。