[发明专利]一种基于核酸适体的可捕获癌细胞的微流控芯片及其制备和癌细胞的分离方法

权利要求书

1.一种基于核酸适体的可捕获癌细胞的微流控芯片，所述微流控芯片由上层PDMS聚合物芯片和下层的玻片载体可逆封接而成，所述微流控芯片上设有进样口和出样口，所述PDMS聚合物芯片和玻片载体之间设有蛇形状的细胞捕获通道，所述细胞捕获通道将所述进样口和出样口连通，所述细胞捕获通道的内上表面设有自上往下突出的鱼骨形结构，其特征在于：所述细胞捕获通道的底表面为凹凸不平的玻片载体表面；所述细胞捕获通道的底表面上固定有亲和素。

2.根据权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于：所述凹凸不平的玻片载体表面是经过氢氟酸腐蚀处理后成型得到。

3.一种微流控芯片的制备方法，包括以下步骤：

（1）PDMS聚合物芯片：先用绘图软件绘制PDMS聚合物芯片掩膜版图，并使用高分辨率激光打印机打印在透明胶片上制得光刻掩膜板，然后利用此光刻掩膜板并通过光刻工艺制作得到芯片模具；

（2）PDMS浇铸：将PDMS前聚体与固化剂按常规质量比进行物理混合，充分搅拌，真空脱气后浇铸在上述步骤（1）制得的芯片模具上，烘干固化后冷却，得到PDMS聚合物芯片；

（3）氢氟酸处理：将氢氟酸溶液均匀涂覆在一洁净的玻璃表面，静置后用水洗净，用氮气吹干，得到玻片载体；

（4）键合：将步骤（2）制得的PDMS聚合物芯片与步骤（3）制得的玻片载体加压可逆键合，得到半成品；

（5）亲和素的修饰：将含有亲和素的磷酸缓冲液通过半成品的进样口通入到半成品的细胞捕获通道内，使其在细胞捕获通道中孵育，再用结合缓冲液冲洗，制得微流控芯片。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，烘干固化的温度为70℃～90℃，热烘时间为2～6小时。

5.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中，氢氟酸溶液的体积分数为10%～40%。

6.一种癌细胞的分离方法，包括以下步骤：

（1）向含有目标癌细胞的样本中加入核酸适体溶液，将混合溶液置于冰上孵育；所述核酸适体溶液中含有的核酸适体是可与目标癌细胞进行特异性反应结合的核酸适体，且在该核酸适体序列的3’端修饰有生物素；

（2）将步骤（1）中孵育后的混合溶液通入权利要求1或2所述微流控芯片的进样口中，使混合溶液在所述细胞捕获通道内流动，在室温下孵育，混合溶液中含有的目标癌细胞通过所述生物素与亲和素的结合，被捕获到所述微流控芯片的玻片载体表面，混合溶液中的其他成分则通过所述出样口流出，实现对目标癌细胞的分离。

7.根据权利要求6所述的癌细胞的分离方法，其特征在于：所述目标癌细胞包括淋巴癌细胞、肺癌细胞或肝癌细胞，所述样本为人体全血样本。

8. 根据权利要求6或7所述的癌细胞的分离方法，其特征在于：所述步骤（2）中，混合溶液是以0.5 mL/h～3 mL/h的流速通入到微流控芯片的进样口中；室温下孵育的时间为5min～15min。