[发明专利]猪流行性腹泻病毒变异株检测用引物及其检测试剂盒

权利要求书

1.猪流行性腹泻病毒变异株检测用的引物，包括

正向引物PEDV-VF（SEQ ID NO.1）：5’-TTGGTGAAAACCAGGGTGTC-3’

和反向引物PEDV-VR（SEQ ID NO.2）： 5’-CAACACTATGTTCACTCA-3’；

该引物从感染猪流行性腹泻病毒变异株的病料提取的总RNA中扩增出327 bp DNA片段。

2.一种用于检测猪流行性腹泻病毒变异株的试剂盒，该试剂盒含有权利要求1所述的引物。

3.、如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，包括： 

（1）阴性对照：  取灭菌的DEPC水，置-20℃冰箱保存；

（2）RT反应液：

      无菌DEPC水           4.75μL

      10μmol/L dNTP          1μL

20μmol/L PEDV-VR      1μL

5×反转录缓冲液         4μL

40 U/μL RNA酶抑制剂   1μL

0.1 mmol/L DTT          2μL

200U/μL反转录酶       0.25μL

混匀后-20℃保存；

（3）PCR反应液：

无菌DEPC水              32.5μL

20μmol/LPCR引物混合液    2μL

10×PCR缓冲液        5μL

2.5 mmol/L dNTP       8μL

5U/μL DNA聚合酶     0.5μL

混匀后-20℃保存。

4.如权利要求2或3所述的试剂盒，还包括：阳性对照为猪流行性腹泻病毒变异株JS-HZ2012发生腹泻的粪便样品。