[发明专利]蛋白质的分泌产生方法

说明书

技术领域

本发明涉及异源蛋白质的分泌产生方法。

背景技术

作为利用微生物的异源蛋白质分泌产生，迄今为止已经有用芽孢杆菌属细菌(非专利文献1)、金属同化性酵母、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)(非专利文献2)、曲霉属丝状真菌(非专利文献3和4)等分泌产生异源蛋白质的报道。

也已经有用棒状杆菌型细菌(coryneform bacteria)分泌产生异源蛋白质的尝试。关于用棒状杆菌型细菌分泌产生异源蛋白质，已经报道了谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)(下面也缩写为C.glutamicum)分泌核酸酶和脂肪酶(专利文献1，非专利文献5)，枯草杆菌蛋白酶等蛋白酶的分泌(非专利文献6)，利用棒状杆菌型细菌的细胞表层蛋白质PS1和PS2(也称CspB)的信号肽的蛋白质分泌(专利文献2)，利用PS2(CspB)的信号肽的纤连蛋白结合蛋白的分泌(非专利文献7)、使用PS2(CspB)和SlpA(又称CspA)的信号肽的转谷氨酰胺酶原的分泌(专利文献3)，使用变异型分泌系统的蛋白质分泌(专利文献4)，利用突变株的转谷氨酰胺酶原的分泌(专利文献5)，使用Tat依赖性信号肽的蛋白质分泌(专利文献6)等等。

还已知在通过将异源蛋白质与信号肽连接来分泌产生异源蛋白质的方法中，在信号肽与异源蛋白质之间插入由来自芽孢杆菌属细菌细胞壁蛋白质的N端序列的一个或多个氨基酸残基组成的序列，由此分泌产生该异源蛋白质(专利文献7和8)。

CspB(PS2)是一种见于谷氨酸棒状杆菌的细胞表层蛋白质(非专利文献8)。棒杆菌属细菌中既有存在细胞表层蛋白质CspB的同源物的菌株，也有不存在此类同源物的菌株，而且关于28个谷氨酸棒状杆菌菌株已经报道了CspB同源物的氨基酸序列(非专利文献9)。对来自这28个菌株的CspB同源物的N末端氨基酸序列进行比较发现，信号肽的30个氨基酸残基以及成熟蛋白质的N端3个氨基酸残基(Gln-Glu-Thr)是完全保守的(非专利文献9)。

如前文所述，通过将异源蛋白质与CspB(PS2)的信号肽连接来分泌产生异源蛋白质的方法是已知的(例如专利文献2和3，非专利文献7)。此外，还有报道称，在一项通过将异源蛋白与CspB(PS2)的信号肽连接来分泌产生异源蛋白质的方法中，将谷氨酸棒状杆菌ATCC13869的成熟CspB蛋白(SEQ ID NO:96)的N端1、14或38个氨基酸残基插入信号肽与异源蛋白(转谷氨酰胺酶原)之间，以通过分泌产生来产生该异源蛋白质，并且当插入38个氨基酸残基时，转谷氨酰胺酶原的分泌产生量得到增加(专利文献3)。然而，除了专利文献3中描述的发现之外，尚不知晓在通过连接异源蛋白质与信号肽来分泌产生异源蛋白质的方法中将包含Gln-Glu-Thr的氨基酸序列插入信号肽与异源蛋白质之间来表达该异源蛋白质。

已经有人报道，谷氨酸棒状杆菌的细胞表层蛋白CspB的成熟蛋白的N端氨基酸残基对于Edman降解是封闭的，因此有人提出该原本的N端氨基酸残基，即谷氨酰胺残基，被转化为焦谷氨酸残基(非专利文献8)。然而，尚不知晓通过将Gln-Glu-Thr的氨基酸序列插入信号肽与异源蛋白质之间而表达的异源蛋白质的N端谷氨酰胺残基被转化为焦谷氨酸残基。

现有技术文献

专利文献

专利文献1:美国专利号4,965,197

专利文献2:日本专利申请特表平6-502548

专利文献3:日本特许4320769

专利文献4:日本专利申请特开平11-169182

专利文献5:日本特许4362651

专利文献6:日本特许4730302

专利文献7:日本专利申请特开平11-341991

专利文献8:日本专利申请特开2000-316579

非专利文献

非专利文献1:Microbiol.Rev.,57,109-137(1993)

非专利文献2:Biotechnol.,11,905-910(1993)

非专利文献3:Biotechnol.,6,1419-1422(1988)

非专利文献4:Biotechnol.,9,976-981(1991)

非专利文献5:J.Bacteriol.,174,1854-1861(1992)