[发明专利]蛋白质的分泌产生方法

权利要求书

1.一种产生异源蛋白质的方法，包括：

培养具有用于分泌表达异源蛋白质的基因构建体的棒状杆菌型细菌；和

收集分泌产生的异源蛋白质，

其中所述基因构建体包含：在棒状杆菌型细菌中发挥功能的启动子序列，连接在该启动子序列下游的编码在棒状杆菌型细菌中发挥功能的信号肽的核酸序列，以及连接在该编码信号肽的核酸序列下游的编码包含Gln-Glu-Thr的氨基酸序列与所述异源蛋白质的融合蛋白质的核酸序列，

条件是所述包含Gln-Glu-Thr的氨基酸序列不是由SEQ ID NO:96的1-14位或1-38位的氨基酸残基组成的氨基酸序列。

2.权利要求1所述的方法，其中所述包含Gln-Glu-Thr的氨基酸序列是选自下述氨基酸序列(A)-(H)的氨基酸序列：

(A)Gln-Glu-Thr

(B)Gln-Glu-Thr-Xaa1(SEQ ID NO:102)

(C)Gln-Glu-Thr-Xaa1-Xaa2(SEQ ID NO:103)

(D)Gln-Glu-Thr-Xaa1-Xaa2-Xaa3(SEQ ID NO:104)

(E)由Gln-Glu-Thr与成熟CspB的4-7位的氨基酸残基融合而构成的氨基酸序列，

(F)由Gln-Glu-Thr与成熟CspB的4-8位的氨基酸残基融合而构成的氨基酸序列，

(G)由Gln-Glu-Thr与成熟CspB的4-17位的氨基酸残基融合而构成的氨基酸序列，

(H)由Gln-Glu-Thr与成熟CspB的4-50位的氨基酸残基融合而构成的氨基酸序列，

其中Xaa1是Asn、Gly、Thr、Pro或Ala，Xaa2是Pro、Thr或Val，且Xaa3是Thr或Tyr。

3.权利要求2所述的方法，其中所述包含Gln-Glu-Thr的氨基酸序列选自下组的氨基酸序列：Gln-Glu-Thr-Asn-Pro-Thr(SEQ ID NO:97)、Gln-Glu-Thr-Gly-Thr-Tyr(SEQ ID NO:98)、Gln-Glu-Thr-Thr-Val-Thr(SEQ ID NO:99)、Gln-Glu-Thr-Pro-Val-Thr(SEQ ID NO:100)、和Gln-Glu-Thr-Ala-Val-Thr(SEQ ID NO:101)。

4.权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述基因构建体在所述编码包含Gln-Glu-Thr的氨基酸序列的核酸序列和所述编码异源蛋白质的核酸序列之间还包含编码用于酶消化的氨基酸序列的核酸序列。

5.权利要求4所述的方法，其中所述用于酶消化的氨基酸序列是因子Xa蛋白酶的识别序列，或者ProTEV蛋白酶的识别序列。

6.权利要求5所述的方法，其中所述蛋白酶的识别序列是SEQ ID NO:105或106中所示的氨基酸序列。

7.权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述在棒状杆菌型细菌中发挥功能的信号肽是来源于棒状杆菌型细菌的CspB的信号肽。

8.权利要求7所述的方法，其中所述CspB的信号肽具有SEQ ID NO:92中所示的氨基酸序列。

9.权利要求1-8中任一项所述的方法，其中作为培养对象的棒状杆菌型细菌是属于棒状杆菌属(Corynebacterium)或短杆菌属(Brevibacterium)的细菌。

10.权利要求1-9中所述的方法，其中作为培养对象的棒状杆菌型细菌是谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)或Corynebacterium stationis。