[发明专利]从人B细胞产生的具有甲型流感病毒中和活性的结合分子

说明书

技术领域

本发明涉及具有针对甲型流感病毒之中和活性的人单克隆抗体，其来源于人B细胞，所述人B细胞选择自从甲型流感病毒的感染中恢复的患者的血液。

背景技术

流感是由流感病毒的呼吸系统感染引起的疾病，常发生在冬季。已知流感具有很高的感染性，并且影响所有年龄组，特别是老年人(Treanor J，2004，N Engl J Med.350(3)：218-20)。流感病毒是包膜的RNA(核糖核酸)病毒，属于正粘病毒(Orthomyxoviridae)科，具有由八个反义单链RNA(核糖核酸)区段构成的基因组。这些流感病毒被划分为甲型、乙型和丙型。根据其主要表面蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)，甲型流感病毒被进一步划分为亚型。到目前为止，已经鉴别了16种HA和9种NA(Cheung TK和Poon LL 2007，Ann N Y Acad Sci 1102：1-25)。流感病毒可根据其类型影响鸟、猪和人，并且具有由RNA区段构成的基因组，因为这个原因，其基因可连续地突变和重组，产生新的遗传改变(Treanor J，2004.N Engl J Med.350(3)：218-20)。由于这种连续的突变，难以获得针对流感病毒的永久免疫力，因此目前被认为最有效的预防方法是这样的方法，每年施用针对预计将流行之特定类型的流感病毒的疫苗以每年产生针对流感病毒的免疫力。

针对流感病毒的疫苗通常使用卵产生，但该生产方法是耗时且低效的方法。因此，该方法的问题在于难以每年在有限的时间框架内生产足够量的疫苗。为了解决这一问题，几家药物公司(GSK、Baxter等)已经积极地进行了通过细胞培养产生疫苗的方法的研究。此外，如果发生流感病毒感染大流行，则在短时间内开发针对感染的疫苗是非常困难的。而且，由于与耐药性突变病毒出现相关的问题，抗病毒药物并非完全可靠的。

为了克服这个问题，最近已积极地开发了针对流感病毒的抗体(Throsby等，2008，PloS One 3(e3942)；Sui等，2009，Nature structural&molecular biology 16(265-273)；Simmons等，2007，PloS Medicine 4(e178)；Wrammert等，2011，J Exp Med.208(181-193)；Corti等，2011，Science 333(850-856))。

来自恢复患者的血液产物已经被用于治疗感染多种病毒的患者，以及用于治疗流感感染大流行。例如，当感染西班牙流感病毒的患者具有肺炎症状时，收集自从流感病毒感染恢复之患者的血液产物被用于治疗流感病毒(Luke等，2006.Annals of internal medicine.145：599)。因此，从人血浆中纯化超免疫球蛋白(IgIv)并用于治疗感染多种病毒的患者，但如上所述获得的产物由于血液中潜在的感染原而可能是不安全的，并且对于大量生产是低效的。

人B细胞被用于筛选特定人单克隆抗体。然而，通过EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)永生化人B细胞的效率较低且耗时。为了克服这一缺点，已经开发并使用了新技术。这些技术之一是利用RT-PCR法直接从B细胞获得抗体的遗传信息。例如，有一种方法包括：对表达针对特定抗原之抗体的B细胞进行染色，使用FACS分选仪分离B细胞，通过RT-PCR方法从单个B细胞获得抗体的遗传信息，将所述遗传信息插入到表达载体中，并将所述表达载体转染到动物细胞中以产生大量抗体。为了以更简便且更快速的方式进行该生产方法，可以使用以下技术。新技术“芯片上的免疫斑点阵列测定”(immunospot array assay on a chip，ISAAC)能够在几周内通过筛选单个B细胞(分泌特定单克隆抗体)获得抗体基因(Jin等.，2009 Nat Med.15，1088-1092)。这样获得的抗体是天然人抗体，其在免疫原性问题方面可以更有效。

公开内容

技术问题

本发明的一个目的是提供具有针对甲型流感病毒之中和活性的结合分子。

本发明的另一个目的是提供编码所述结合分子的分离的核酸分子。

本发明的另一个目的是提供具有插入其中的所述分离的核酸分子的表达载体。

本发明的另一个目的是提供用表达载体转染的产生结合分子的细胞系。

本发明的另一个目的是提供用于筛选结合分子的方法。