[发明专利]获得针对前加压素原或其片段的结合物的方法

说明书

本发明涉及获得和/或验证针对前加压素原（prepro-Vasopressin）或其包括和肽素（Copeptin）在内的片段的结合物的方法、结合物和试剂盒，所述试剂盒包含用于定性或定量检测生物样品中前加压素原或其包括和肽素在内的片段的结合物，和用于产生前加压素原或其包括和肽素在内的片段的肽。

发明背景

前加压素原可以借助信号肽切割加工成加压素原，所述加压素原可以进一步加工成加压素、神经垂体素运载蛋白-2及和肽素，后者代表前体肽的C端部分。加压素，也称作抗利尿激素(ADH)，是水和电解质平衡的关键调节物。测量生物样品中的加压素在临床工作中是几乎不可能，原因是与其从循环快速清除、与血清中的血小板相互作用和小尺寸相关的巨大技术难题，见“文献”，第[0039]段，[1-3]。已经成功地建立以化学计量方式用加压素一起形成的和肽素作为加压素的替代标记。这种成功的主要原因是考虑到其极高的离体稳定性，这使得它适合于例行使用[4-6]。

临床研究已经揭示出众多适应症，其中和肽素的测量提供高度有用的诊断信息，包括心脏疾病、肺病、传染病、肾脏疾病，水和电解质平衡的病理紊乱及其他[5]。用于检测和肽素的公布方法是免疫测定法[4，6]。

前加压素原和其片段也可以在某些类型的癌症中异位表达，抗和肽素抗体可以用来检测组织样品中的表达(EP1539818A2)。

尽管已经描述了用于产生抗和肽素抗体的免疫原，关于这些抗体的实际表位知之甚少(如果有的话)。表1中列出已描述的抗人和肽素抗体。在现有技术中，未曾注意到以下问题：抗和肽素抗体的表位特异性是否或怎样可能影响使用这类抗体检测生物样品中前加压素原或其包括和肽素在内的片段的准确度和稳健性。反而总体上认为和肽素本身是非常稳定的。用于检测成熟和肽素的抗体，其表位以相当非特定方式限定为定位于“和肽素C-末端附近”，由德国海德堡Santa Cruz Biotechnology,Inc.提供并推荐用于ELISA和其他应用中。

表1

发明描述

本发明涉及如权利要求中1所述的方法、如权利要求中10所述的肽和其如权利要求11中所述的用途、如权利要求中12所述的结合物，如权利要求14中所述的所述结合物的用途和如权利要求18中所述的试剂盒。优选的实施方案在相应的从属权利要求中描述。

详细而言，在第一方面，本发明涉及一种获得和/或验证针对前加压素原(SEQ ID NO.1)或其至少6个氨基酸长度的包括和肽素(SEQ ID NO.2)在内的片段的结合物的方法，包括至少一个以下步骤：

a)使用开发物(developer)产生所述结合物，所述开发物包含与前加压素原(SEQ ID NO.1)的C端部分相对应、但缺少第164位氨基酸的氨基酸序列中所含有的至少6个氨基酸长度的氨基酸序列；

b)确定所述结合物是否能够结合与前加压素原(SEQ ID NO.1)的C端部分相对应、但缺少第164位氨基酸的氨基酸序列中所含有的至少4个氨基酸长度的氨基酸序列；

c)从多种结合物中选择并且任选地分离能够结合与前加压素原(SEQ ID NO.1)的C端部分相对应、但缺少第164位氨基酸的氨基酸序列中所含有的氨基酸序列的结合物；

d)以所述结合物实施结合测定，以确定生物样品中前加压素原或其至少6个氨基酸长度的包括和肽素在内的片段的离体稳定性；

e)以所述结合物和另一种用于比较目的的结合物实施结合测定法，以确定生物样品中前加压素原或其至少6个氨基酸长度的包括和肽素在内的片段的浓度；

其中C端部分由前加压素原(SEQ ID NO.1)的第138至164位氨基酸组成，

以便获得能够结合与前加压素原(SEQ ID NO.1)的第138至163位氨基酸相对应、但缺少第164位氨基酸的氨基酸序列中所含有的表位的结合物或结合物的混合物。