[发明专利]用于高效及靶向递送治疗性分子至CXCR4细胞的方法和试剂

说明书

技术领域

本发明涉及包括靶向部分和治疗性部分或诊断部分的缀合物连同其用于治疗的用途。

背景技术

趋化因子受体在某些细胞的表面上表达，其与称作趋化因子的细胞因子相互作用。CXC趋化因子受体4(CXCR4)是一种转导其内源性配体，趋化因子CXCL12(间质细胞衍生因子-1，SDF-I)的信号的G蛋白偶联受体。在CXCR4/CXCL12相互作用后，触发胞内钙(Ca2⁺)离子流。这造成多种细胞反应，包括允许细胞穿行于有机体内的趋化性。

CXCR4在髓样细胞、T-淋巴细胞、B-淋巴细胞、上皮细胞、内皮细胞和树突细胞上表达。因此，这种分子在肿瘤细胞表面上的表达使其成为合适候选物，作为将治疗性化合物特异性靶向表达所述分子的细胞的配体。例如，WO 2006029078描述了包括蛋白易位结构域的融合构建体，所述蛋白易位结构域由Tat蛋白、CXCR4受体结合性DV3肽结构域和作为cdk2拮抗剂肽或p53激活肽的治疗剂形成。借助所述蛋白易位结构域，将这些构建体靶向表达CXCR4的细胞，并且将治疗剂转位于细胞内部。然而，除仅在构建体与细胞对接中发挥作用的CXCR4配体之外，这些构建体需要于细胞内部递送所述治疗剂的转位结构域。

Driessen(德雷森)等人(Molecular Therapy(分子治疗)，2008，16：516-524)描述了一种与磷脂共价连接的肽类似物4-氟苯甲酰-RR-(L-3-(2-萘基)丙氨酸)-CYEK-(1-瓜氨酸)-PYR-(1-瓜氨酸)-CR(SEQ ID NO：1)靶向基于脂质的基因递送载具至CXCR4+-细胞的用途。然而，这种方法示出低效率并且需要通过使靶细胞与缀合物接触之前与VEGF接触，增加CXCR4在细胞表面上的表达。

Le Bon(勒·邦)等人，(Bioconjugate Chem.(生物共轭化学)(2004，15，413-423)描述了使用脂质缀合物和聚阳离子缀合物时，CXCR4特异性配体AMD3100和AMD3100促进特定基因转移至表达CXCR4的细胞中的用途。然而，这种方法需要佛波醇酯衍生物与聚阳离子脂质治疗剂缀合以便增加靶细胞表面上的CXCR4表达。

Egorova(叶戈洛娃)等人，(J Gene Med(基因医学杂志)2009；11：772-781)描述了由CXCR4配体(肽KPVSLSYRSPSRFFESH-K9-生物素[(SEQ ID NO：2)-生物素]、KPVSLSYR-K9-生物素[(SEQ ID NO：3)-生物素]和D-LGASWHRPDK-K9-生物素[(SEQ ID NO：4)-生物素]和静电结合聚赖氨酸区的DNA形成的缀合物及其递送核酸至CXCR4阳性细胞的用途。然而，这些缀合物具有低效率并依赖于使用针对CXCR4示出激动活性的肽，这可能导致增加的肿瘤增殖作为CXCR4受配体刺激的反应。

Tamamura(玉村)等人(Bioinorganic&Medicinal Chemistry，(生物有机化学与医药化学)2001，9：2179-2187)描述了T140 CXCR4激动剂的不同类似物和3′-叠氮-3-脱氧胸苷(AZT)缀合物和它们用于防止MT-4细胞中HIV-1诱导的细胞致病性。然而，没有提供这些缀合物能够在体内靶向CXCR4表达细胞或与CXCR4配体缀合的AZT可以被CXCR4内化的证据。

另外，全部这些缀合物均通过递送治疗剂至细胞表面发挥作用，从所述细胞表面开始，所述药剂的内化需要其与细胞表面上的特定受体结合。因此，本领域需要适于特异性递送感兴趣的分子至CXCR4细胞的其他缀合物，这些缀合物克服现有技术描述的缀合物的问题，并且其中治疗剂的内化因使用CXCR4靶向分子而发生，所述CXCR4靶向分子可以由CXCR4表达细胞连同与所述分子结合的治疗剂一起内化。

发明内容

在第一方面，本发明涉及一种缀合物，包括

(i)包括序列RRWCYRKCYKGYCYRKCR(SEQ ID NO：5)的靶向肽或其功能等同变体，以及

(ii)治疗剂

其中所述靶向肽能够特异性结合CXCR4并促进所述治疗剂在表达CXCR4的细胞中的内化。

在另外方面，本发明涉及编码根据本发明的缀合物的多核苷酸、包括所述多核苷酸的载体和包含所述多核苷酸或所述载体的宿主细胞。

在另一个方面，本发明涉及用于医学中使用的缀合物、多核苷酸、载体或宿主细胞。