[发明专利]一种特异性检测植物乳杆菌的检测方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种特异性检测植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）的方法，其特征在于，其包括如下步骤：

（1）提取待测样品的基因组DNA；

（2）以步骤（1）所提取的基因组DNA为模板，采用核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物进行多重PCR反应，以扩增特征性片段；

（3）对步骤（2）得到的扩增产物进行电泳检测并进行结果判断。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）所述多重PCR反应的反应体系中包括浓度各为0.2～0.5μmol/L的序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ IDNO.6所示的引物，0.1～0.3mmol/L的dNTP，1×PCR缓冲液，0.5～1.5mmol/L的Mg²⁺，0.05～0.15U/μL的Taq DNA聚合酶和1.0～2.0ng/μL的DNA模板。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）所述多重PCR反应的反应体系中包括浓度各为0.4μmol/L的序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物，0.2mmol/L的dNTP，1×PCR缓冲液，1mmol/L的Mg²⁺，0.05U/μL的Taq DNA聚合酶，2.0ng/μL的DNA模板。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）所述多重PCR反应的反应程序为：①94～95℃，4～5min；②94～95℃，30～40s；③55～57℃，30～50s；④71～73℃，15～60s；步骤②至④共20～30个循环；⑤71～73℃，8～10min；⑥3～5℃保存。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）所述多重PCR反应的反应程序为：①95℃，5min；②95℃，40s；③55℃，30s；④72℃，30s；步骤②至④共25个循环；⑤72℃，8min；⑥4℃保存。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）所述的电泳为1%～3%琼脂糖凝胶电泳。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）所述结果判断的方法为在紫外凝胶成像仪下拍照成像，采用序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示引物的PCR反应产物，若同时存在101bp，189bp和378bp的核酸片段，则说明待测样品中存在植物乳杆菌；若不同时存在101bp，189bp和378bp的核酸片段，则说明待测样品中不存在植物乳杆菌。

8.一种用于特异性检测植物乳杆菌的试剂盒，其包括核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物。

9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括dNTP、PCR缓冲液、Mg²⁺和Taq DNA聚合酶中的一种或多种。

10.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括阳性对照和/或基因抽提试剂。