[发明专利]一种利用超高效液相色谱/三重四极杆串联质谱法检测多组分微囊藻毒素的方法

权利要求书

1. 一种利用超高效液相色谱/三重四极杆串联质谱法检测多组分微囊藻毒素的方法，其步骤为：

（1）标准曲线绘制

（                                               ）微囊藻毒素标准储备液的配制：精确称量MC-LR、RR、YR、LW、LF、LA、LY标准品中各100μg，加入1ml甲醇，制成浓度均为100mg/L的标准溶液储备液，-80℃保存；

（）将微囊藻毒素标准储备液用甲醇稀释，配制浓度依次为0.1、1.0、2.0、5.0、10.0μg/L的系列标准溶液，绘制标准曲线；

（2）微囊藻毒素样品的采集及前处理

（）采集一定体积的水样，4℃冷藏保存；

（）将上述水样经0.45μｍ滤膜减压过滤；

（）滤液的pH值调节至4.0，过C₁₈反相固相萃取柱，该C₁₈反相固相萃取柱在使用前进行活化，活化剂为甲醇：三蒸水以1:1的体积比配制；将水样以5～10 mL /min的流速流过固相萃取柱进行富集浓缩；

（）上样完毕后，用体积百分比为20%甲醇水溶液淋洗样品，用氮气吹干C₁₈反相固相萃取柱后，以1mL /min，用体积为步骤（）中的样品体积的5%的甲醇将固相萃取柱中的微囊藻毒素洗脱，洗脱液收集于浓缩瓶内，氮吹浓缩至步骤（）中的样品体积的0.5%定容，并经针头过滤器过滤保存，待检测用；

（3）在以下条件下进行检测分析

（）离子源参数

电喷雾：               正离子

毛细管电压：           2.50kV

锥孔电压：             V

萃取电压：             3V

离子源温度：           150℃

脱溶剂气温度：         350℃

脱溶剂气流量：         900L/hr

锥孔反吹气流量：       20 L/hr

（）质量分析器参数

低端分辨率LF Lens1：   13.0V

高端分辨率HM Lens1：  13.0V

离子能量1：            1.0V

入口透镜电压：         -2V

碰撞梯度：             V

出口电压：             1.0V；

低端分辨率LF Lens2：   13.0V

高端分辨率HM Lens2：  13.0V

离子能量 2 ：          1.0V

增益：                 1.00V

碰撞气流量：           0.13ml/min

采用的多反应监测（MRM）模式，参数设定如下：

表1  MC  MRM方法参数

名称分子量Cone(V)母离子特征碎片离子碰撞能量(eV)DwellMC-RR1038.234520.0 135.1320.1    213.0 310.1MC-YR1045.19801045.6135.2550.1    163.2500.1MC-LR995.1771995.6135.0 550.1    163.2580.1MC-LA910.0 35 910.6135.1550.1    163.1410.1MC-LY1002.17431002.6135.1560.1    163.1500.1MC-LW1025.2401025.7135.2650.1    213.1400.1MC-LF986.235986.7135.2580.1　　　　163.2450.1

（）液相色谱方法

色谱柱：              ACQUITY UPLC BEH 2.1 x 50 mm, 1.7 μm

柱温：                40℃

进样量：              10ul

具体的液相色谱条件如下：

表2  液相色谱条件

时间/min流速ml/min0.2%甲酸水乙腈Curveinitial0.457030　2.50.45673363.0 0.45584265.0 0.45564436.0 0.4559547.0 0.4570301

。

2.根据权利要求1所述的一种利用超高效液相色谱/三重四极杆串联质谱法检测多组分微囊藻毒素的方法，其特征在于，所述步骤（2）中的C₁₈反相固相萃取柱采用的是Bond Elut C₁₈反相固相萃取柱。