[发明专利]一种检测热毒宁注射液中高分子物质的方法

说明书

技术领域

本发明屈于药品检测领域，涉及一种检测热毒宁注射液中高分子物质的方法。

背景技术

中药注射剂是我国中医药创新的重要成果，其生物利用度高、作用迅速，在治疗急重症方面具有优势，广泛应用于临床。随着我国药品不良反应监测工作的发展，中药注射剂的安全性问题也逐渐显现。引起不良反应的因素很多，有学者认为大分子物质的存在亦是其因素之一。热毒宁注射液(国药准字Z20050217，江苏康缘药业股份有限公司生产)处方由栀子、金银花、青蒿三味药材组成，具有清热、疏风、解毒等功效，其除有效成分外，也可能含有导致不良反应的大分子物质，如蛋白质、聚合物等。为保证临床用药的安全，更好地控制药品质量，增加中药注射剂高分子物质检测十分必要。

王一博等人《HPSEC法检测中药注射液中的高分子量物质》建立高效分子排阻色谱法(HPSEC)检测中药注射液中的高分子量物质，该文献方法的流速偏低，致使保留时间过长，且易造成峰形展宽等现象；赖宇红等人《注射用丹参分子排阻色谱及指纹图谱差减分析》分别应用凝胶分子排阻色谱、碳十八反相液相色谱进行指纹图谱分析，通过综合差减分析揭示非小分子酚酸类成分信息。该文献采用的流动相为三氟醋酸-乙腈-水(0.05∶10∶90)，实验结果表明采用此种流动相测定，高分子物质的色谱行为为非理想排阻行为。王新彤《清开灵注射液中大分子蛋白的检测研究》公开了尺寸排阻色谱法可用于清开灵注射剂中大分子蛋白分析，该文献的线性关系考察只采用了3个对照品进行考察，数据可靠性偏低。

CN102411033A中公开了一种检测中药注射液中高分子物质的方法，以胸腺肽α和人生长激素释放抑制因子为对照品，采用TSK G2000SWXL型凝胶柱对中药注射液中的高分子物质进行检测，结果在进样体积20μl，检出限为0.08μg下未能检出大分子物质。但是该方法的流动相为乙腈-0.83％三氟乙酸溶液(40∶60)，根据《中国药典2010年版二部》分子排阻色谱法的要求：流动相中有机相比例不应超过30％，且溶液的pH值不宜超出色谱柱的耐受力，该方法有机相比例超出30％，且酸度过高，超出色谱柱的耐受范围，不符合《中国药典》的技术要求，其检测结果的可信度不高。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述缺陷，提供一种检测热毒宁注射液中高分子物质的方法。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

一种检测热毒宁注射液中高分子物质的方法，包含如下步骤：

(1)对照溶液的制备：配制胸腺肽α1标准品溶液；

(2)供试品溶液的制备：用流动相稀释热毒宁注射液，配制成供试品溶液；

(3)检测：分别吸取供试品溶液和对照溶液注入高效液相色谱仪，按照高效液相色谱法测定各溶液的色谱将先于胸腺肽α1出峰时间的峰视为高分子物质，按面积归一化法计算其含量。

步骤(1)所述的配制胸腺肽α1标准品溶液优选取胸腺肽α1标准品，用水溶解并稀释制成胸腺肽α1浓度为25-50μg/ml的溶液，摇匀，即得。

步骤(2)所述的供试品溶液的制备优选：精密量取热毒宁注射液适量，加流动相稀释5-10倍，摇匀，即得供试品溶液。

所述的步骤(3)中，高效液相色谱条件优选为：色谱柱：凝胶色谱柱；以乙腈-0.1％三氟乙酸体积比为30∶70为流动相；流速为每分钟0.5-0.7ml；柱温25-30℃；检测器：VWD检测器，检测波长为214±1nm；理论板数按胸腺肽α1计算应不低于10000。

所述的步骤(3)中，高效液相色谱条件进一步优选为：色谱柱：凝胶色谱柱；以乙腈-0.1％三氟乙酸体积比为30∶70为流动相；流速为每分钟0.7ml；柱温30℃；检测器：VWD检测器，检测波长为214nm；理论板数按胸腺肽α1计算应不低于10000。

步骤(3)中高效液相色谱检测的进样量优选10μl。

所述的检测热毒宁注射液中高分子物质的方法，优选包含如下步骤：

(1)对照溶液的制备：

取胸腺肽α1标准品适量，精密称定，用水溶解并稀释制成胸腺肽α1浓度为25μg/ml的溶液，摇匀，即得，所述的胸腺肽α1标准品分子量为3108；

(2)供试品溶液的制备：

精密量取热毒宁注射液1ml，加流动相稀释至10ml，摇匀，即得；

(3)检测：

分别吸取供试品溶液和对照溶液各10μl注入高效液相色谱仪，按照高效液相色谱法测定，各溶液的色谱图中将先于胸腺肽α1出峰时间的峰视为高分子物质，按面积归一化法计算其含量。

有益效果：