[发明专利]一种云芝菌株以及利用其发酵产物提取云芝葡聚糖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物领域，特别是本发明提供一种新的云芝菌株，以及利用该菌株的发酵产物提取云芝葡聚糖的方法。

背景技术

云芝葡聚糖具有多种生物活性，研究表明其具有显著的抗肿瘤、抗溃疡、保肝护肝、抗病毒、降血脂和免疫调节作用，被广泛应用于临床。目前的云芝葡聚糖均是从现有的云芝菌株的发酵产物中提取获得的，并且目前通常采用例如水浸提法、酸提法和碱提法等常规的提取工艺。在采用现有的云芝菌株以及现有的提取工艺中，所提取获得的云芝葡聚糖的最高收率通常不超过10％。同时水浸提法在提取过程中要消耗大量能量，而酸提法与碱提法则污染严重。

出人意外地，本申请人发现了一种新的云芝菌株，并进而在此基础上研发了新的提取工艺，以此来提高云芝葡聚糖的纯度含量，很好地满足了人们对云芝葡聚糖的需求以及环境要求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的云芝菌株。

本发明的另一目的在于提供一种制备云芝葡聚糖的新方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：

一种云芝菌株，其属非招菌目(Aphyllophorales)多孔菌科(Polyporaceae)，其命名为Coriolus versicolor，其保藏登记号为CGMCC No.6760，保藏机构为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏时间为2012年11月07日。该菌株的实验室编号为云芝菌株HT-6。

本发明的上述云芝菌株是从秦岭土壤通过初筛、复筛分离得到的。

菌株鉴定：通过观察HT-6菌株的菌体形态、培养特征，测定其生理生化指标，测定16SrDNA基因序列，构建其系统进化树，最终确定HT-6为云芝菌株。

进一步地，本发明涉及一种制备云芝葡聚糖的新方法，其特征在于包括如下步骤：

步骤一：菌株发酵步骤：将上述保藏登记号为CGMCC No.6760的云芝菌株接种于液体培养基中进行发酵培养4-8天，然后将发酵产物在5000r/min离心10min得到云芝菌丝体；所述液体培养基的组成为葡萄糖13.8g/L、蔗糖5g/L、酵母粉2g/L、蛋白胨20g/L、KH₂PO₄ 2.5g/L、MgSO₄·7H₂O 1.5g/L和VB₁ 8mg/L；所述发酵培养条件为25～30℃，120～150r/min；

步骤二：提取步骤：(1)将上述云芝菌丝体加入2％的Na₂CO₃的60℃热水中，二者的重量比为1∶5，浸提1～2h，反复浸提过滤2～3次，然后合并浸提液并浓缩至原体积的1/5～1/3；

(2)将浓缩后的浸提液采用酶-超声波联用法提取云芝葡聚糖，提取方法如下：称取浸提液置于20倍体积的水中制得水稀释液，用占水稀释液总量1.5重量％纤维素酶、0.8重量％木瓜蛋白酶、3.5重量％菠萝蛋白酶混合酶系在温度为50℃，pH值为5.5的条件下酶解100min，随后把酶解的产物经过升温灭酶，再按照料液比为1∶25的比例，超声提取20min；

(3)将提取液过滤并减压浓缩，除去蛋白，并用活性碳进行脱色处理，然后将滤液离心得上清液，在上清液中加入浓度为95％的乙醇进行沉淀，沉淀物用无水乙醇进行滤洗，真空干燥得到云芝多糖粉末，经高效液相色谱测定分子量，红外光谱测定、GC测定、核磁共振测定进行组成糖分析为云芝葡聚糖。

所述步骤(3)中的减压浓缩是在压力为-0.03Mpa下，温度为70℃进行的；浓缩时间为1小时。

所述步骤(3)中除去蛋白的方法为Sevag法。

除非另有说明，本说明书中的“％”为重量百分比。

本发明的制备方法能显著提高云芝葡聚糖提取率，提取获得的云芝葡聚糖的收率通常超过30％，与常规的水浸提法、酸提法和碱提法等常规的提取工艺所缩短的操作时间近75％，降低能源的消耗，对环境友好，所采用的仪器自动化程度高操作简单，从而为云芝多糖的工业化生产提供了可能。

附图说明

图1为本发明云芝葡聚糖制备流程图。

具体实施方案：

下面结合实施例对本发明作进一步描述，但不限于下列实施例。

实施例1：一种云芝葡聚糖的制备方法，步骤如下