[发明专利]大豆种子总蛋白质的提取方法及其专用试剂

权利要求书

1.一种提取大豆种子总蛋白质的方法，包括如下步骤：

1）取大豆种子和溶液S1按1g:3ml的比例混合提取蛋白质，收集所有物质获得混合物甲；

2）向步骤1）的所述混合物甲中加入与步骤1）所述溶液S1体积相同的溶液S2再提取蛋白质，收集所有物质获得混合物乙；

3）将步骤2）所述混合物乙离心，取上清液用三氯乙酸沉淀，获得所述大豆种子总蛋白质；

所述溶液S1的溶剂为水，溶质为蔗糖、Tris-HCl、乙二醇二乙醚二胺四乙酸、苯甲基磺酰氟和β-巯基乙醇，所述蔗糖、Tris-HCl、乙二醇二乙醚二胺四乙酸、苯甲基磺酰氟和β-巯基乙醇在所述溶液S1中的浓度分别为170g/L、40mmol/L、20mmol/L、2mmol/L和5%体积百分含量；所述溶液S1的pH值为7.5；

所述溶液S2的溶剂为水，溶质为蔗糖、Tris-HCl、乙二醇二乙醚二胺四乙酸、苯甲基磺酰氟和聚乙二醇辛基苯基醚，所述蔗糖、Tris-HCl、乙二醇二乙醚二胺四乙酸、苯甲基磺酰氟和聚乙二醇辛基苯基醚在所述溶液S2中的浓度分别为170g/L、40mmol/L、20mmol/L、2mmol/L和4%体积百分含量；所述溶液S2的pH值为7.5。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1）中所述提取包括将所述大豆种子和所述溶液S1进行研磨的步骤，该研磨的时间为8—12分钟，如10分钟；

和/或，步骤2）中所述提取包括将所述混合物甲和所述溶液S2进行研磨的步骤，该研磨的时间为8—12分钟，如10分钟。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤3）中所述离心的相对离心力为10000g，离心时间为10分钟。

4.根据权利要求1—3中任一所述的方法，其特征在于：步骤3）中所述取上清液用三氯乙酸沉淀中三氯乙酸的使用终浓度为10%体积百分含量，所述沉淀的时间为25—35分钟，如30分钟。

5.根据权利要求1—4中任一所述的方法，其特征在于：步骤3）中所述用三氯乙酸沉淀后，还包括将所述沉淀用溶液S3洗涤的步骤；所述溶液S3为二硫苏糖醇的丙酮溶液，所述溶液S3中二硫苏糖醇的含量为2克/升。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述用溶液S3洗涤按每克所述大豆种子加5mL所述溶液S3的比例进行，所述洗涤的次数为4次以上。

7.植物总蛋白质的提取试剂或试剂盒，包括分别独立包装的权利要求1中的所述溶液S1和所述溶液S2。

8.根据权利要求7所述的试剂或试剂盒，其特征在于：所述试剂或试剂盒包括独立包装的权利要求5中的所述溶液S3。

9.权利要求7或8所述试剂或试剂盒在提取植物总蛋白质中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述植物为大豆，所述提取的器官为所述大豆的种子。