[发明专利]一种提取质粒DNA的试剂和方法

权利要求书

1.一种提取质粒DNA的试剂，其特征在于它包括菌体裂解试剂、蛋白质抽提试剂、质粒DNA沉淀试剂和质粒DNA溶解试剂；所述菌体裂解试剂的组分为：10mM Tris-HCl、1mM EDTA、150mM氯化钠和5mg/ml溶菌酶，以超纯水为溶剂，所述Tris-HCl的PH值为7.5-7.8；所述蛋白质抽提试剂的组分为酚和氯仿的体积比为1∶1的混合物；所述质粒DNA沉淀试剂的组分是PH为7.5的5.5M醋酸钠溶液和无水乙醇，其中醋酸钠溶液和无水乙醇体积比为1∶4；所述质粒DNA溶解试剂的组分为含有0.15mg/ml RNase的超纯水。

2.一种根据权利要求1所述的试剂提取质粒DNA的方法，其特征在于它包括以下步骤：

(1)摇菌扩增质粒；将携带质粒的大肠杆菌接种于LB固体培养基中，挑选单克隆菌落接种于LB液体培养基扩增培养，置于在30-37.5℃恒温摇床上培养，摇床转速为200-250转/分钟；

(2)取培养12-15小时OD₆₀₀达到0.5～0.6之间的生长状态良好的细菌菌液1.5ml于1.5ml离心管，室温下以12000g离心30秒，弃上清；

(3)沉淀中加入100μl所述菌体裂解试剂，充分振荡混匀；

(4)加入100μl所述蛋白抽提试剂，置于涡旋振荡仪上混匀5秒钟；

(5)室温下以12000g离心5分钟以释放质粒DNA；

(6)收集上清，切勿触动蛋白质界面；

(7)加入20μl质粒DNA沉淀试剂和200μl的无水乙醇，颠倒混匀；

(8)室温下以12000g离心1分钟以沉淀质粒DNA；

(9)弃上清，并干燥质粒DNA；

(10)用50μl质粒DNA溶解试剂溶解质粒DNA，-20℃保存备用。