[发明专利]可用于检测与原发性高血压相关的α-内收蛋白基因启动子区甲基化程度的试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种辅助诊断原发性高血压的检测试剂盒，尤其是涉及一种可用于检测与原发性高血压相关的α-内收蛋白基因启动子区甲基化程度的试剂盒。 

背景技术

原发性高血压(essential hypertension，EH)是最常见的心血管疾病之一，其发病率逐年上升，并且呈现明显的年轻化趋势。EH可引起严重的心脏、脑、肾等并发症，是冠心病和脑卒中的主要危险因素。EH是一种由遗传因素和环境因素共同作用而引起的复杂性疾病，寻找EH相关基因进而阐明高血压发病的遗传机制已经成为目前研究的热点。虽然有越来越多的医学研究机构重视并开展高血压的病因研究，且研究多集中于相关候选基因的单核苷酸多态性与原发性高血压的关联性上，但其发病机理仍未被完全阐释清楚，这无疑妨碍了高血压预防及治疗水平的提高。 

内收蛋白(adducin)是细胞膜骨架的组成部分，该蛋白可影响Na+-K+-ATP酶的活性，从而影响肾小管对钠离子的重吸收。此外，内收蛋白是一种异二聚体蛋白，由α亚基和β亚基（或γ亚基）组成。作为内收蛋白的必需亚基，α-内收蛋白是由位于4号染色体的α-内收蛋白基因（Adducin1(alpha)gene，ADD1）(NC_000004.11:2845584..2931803)编码而成的。国内外已有大量研究报道了ADD1基因单核苷酸多态性与EH发病的关系，且研究多集中于Gly460Trp多态位点。 

目前，国内外还没有公开任何关于用于检测与原发性高血压相关的α-内收蛋白基因启动子区甲基化程度的试剂盒相关研究报道。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种可用于检测与原发性高血压相关的α-内收蛋白基因启动子区甲基化程度的试剂盒，其中α-内收蛋白基因启动子区甲基化水平与原发性高血压的患病率呈负相关，检测效率高，针对性强。 

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种可用于检测与原发性高血压相关的α-内收蛋白基因启动子区甲基化程度的试剂盒，该试剂盒包括一对α-内收蛋白基因启动子区甲基化特异性扩增引物及一个甲基化特异性测序引物，其中 

所述的甲基化特异性上游引物具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列： 

5’-AAAATTAGGTTTGGGGATTGTATAAGG-3’， 

所述的甲基化特异性下游引物具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列 

5’-Biotin-CCAAATCATAACTTCACCATAACCAAATAAAC-3’， 

所述的甲基化特异性测序引物如SEQ ID NO.3所示： 

5’-TTTTAGGAGGAGGTTAATTATAATG-3’。 

一种可用于检测与原发性高血压相关的α-内收蛋白基因启动子区甲基化程度的试剂盒的应用，该试剂盒可用于原发性高血压辅助诊断、检测或筛查药物。 

与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明首次公开了可用于检测与原发性高血压相关的α-内收蛋白基因启动子区甲基化程度的试剂盒及其应用，α-内收蛋白基因启动子区域的低甲基化水平导致ADD1基因的高表达，从而影响Na⁺-K⁺-ATP酶的活性和肾小管对钠离子的重吸收，最后导致原发性高血压的发生和发展。因此，α-内收蛋白基因启动子区甲基化水平与原发性高血压的患病率呈负相关，以检测ADD1基因启动子区甲基化水平为基础的诊断试剂盒可以方便快捷地在分子水平上实现对原发性高血压的检测，检测效率高，针对性强，同时，以ADD1基因启动子区甲基化为靶点的药物有望成为高血压辅助诊断、检测和筛选的一种新手段。 

附图说明

图1为被检测序列所在区域（具体位置为Chr4:2845301..2845332），以及所检测的5个CpG点之间的关联性分析结果（例如CpG1与CpG2的相关系数为0.67，CpG2与CpG3的相关系数为0.95）； 

图2为甲基化水平检测结果示例（图中所示百分数为对应CpG位点的甲基化程度， 如图示有CpG1到CpG5的甲基化程度分别为9%，14%，18%，22%，19%），图中虚线框中显示的是对应CpG位点的信号强度，结合该位点附近碱基种类可分析得到其甲基化水平（即虚线框对应的上方数字）。 

具体实施方式

以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。 

具体实施例 

1、研究对象的收集