[发明专利]食品及饲料中貂源性成分实时荧光PCR检测方法

权利要求书

1.貂源性成分检测用引物与探针，其特征在于，包括以下碱基序列：

紫貂、日本貂、黄喉貂源性成分检测引物和探针：

上游引物：  SEQ IDNO：1

下游引物：  SEQ ID NO：2

探针：      SEQ ID NO：3

水貂源性成分检测引物和探针：

上游引物：  SEQ IDNO：4

下游引物：  SEQ IDNO：5

探针：      SEQ ID NO：6。

2.一种貂源性成分检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述貂源性成分检测用引物与探针SEQ ID NO：1~6。

3.一种貂源性及其制品的实时荧光PCR鉴伪方法，其特征在于：利用权利要求1所述的引物与探针SEQ ID NO：1~6，对样品DNA进行实时荧光PCR方法检测。

4.根据权利要求3所述的貂源性及其制品的实时荧光PCR鉴伪方法，其特征在于：利用权利要求1所述的引物SEQ ID NO：1~6，分别对样品按下述方法进行实时荧光PCR检测：

①实时荧光PCR反应体系：

反应体系总体积为25μL，其中：

②实时荧光PCR反应参数：95℃，10s，1个循环；95℃，5s；52℃，10s；72℃，34s；40个循环。

5.根据权利要求3所述的貂源性及其制品的实时荧光PCR鉴伪方法，其特征在于：所述的样品DNA的制备方法如下：

①称取300mg已制备好的样品于2mL离心管中，加入1.5mL CTAB缓冲液和10μL浓度为20mg/μL蛋白酶K，65℃30min振荡混匀；12000r/min离心5min，吸取上清液至一新离心管中，加400μL的体积比为24：1的三氯甲烷：异戊醇，充分混匀；

②12000r/min离心5min，吸取上清液至一新离心管中，加入0.8倍体积异丙醇，室温下沉淀1～2h；

③12000r/min离心10min，弃上清液；70%乙醇洗涤一次，晾干；加入50μL TE，溶解DNA沉淀；

④DNA浓度和纯度的测定：取步骤③获得的DNA溶液加水稀释，至浓度为10~100μg/mL，A260/A280比值1.7~1.9之间，备用。