[发明专利]一种用高效液相色谱纯化台勾霉素B的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种纯化方法，特别是一种高效液相色谱纯化台勾霉素B的方法。

背景技术

台勾霉素(tiacumicins)是由放线菌指孢囊菌Dactylosporangium aurantiacumsubsp.hamdenensis NRRL 18085 产生的一系列18元环大环内酯类抗生素的总称。台勾霉素具有抗各种革兰氏阳性细菌的活性，特别是针对艰难梭菌和结核杆菌具有明显的抗菌活性，同时还具有抗肿瘤活性。研究发现台勾霉素中tiacumicn B 是最好的活性组分，拥有两个脱氧糖基和一个芳香环支链，C-18为R-羟基，对艰难梭菌具有较低的最小抑制浓度值。台勾霉素B（Tiacumicin B）是指具有下列结构的分子：

。

台勾霉素B因其疏水性很强，在水中几乎不溶，所以一般采用反相色谱的方法制备。

中国专利 102219815A公开了一种从孢囊菌制备台勾霉素类化合物的方法，该方法包括用凝胶 Sephadex LH-20和硅胶 YMCGEL ODS-A反相中压色谱法和薄层层析法相结合从孢囊菌发酵产物中分离出纯度低的台勾霉素类化合物。

中国专利 102030791 A公开了四种台勾霉素类化合物的制备方法，该方法采用大孔吸附树脂XAD16从发酵液中提取出粗提物，然后结合萃取和浓缩得到粗品，这些粗品纯度较低，还要经过正相硅胶层析、凝胶柱层析和反相中压色谱才能分别得到四种台勾霉素类化合物。

中国专利1688707A公开了一种台勾霉素的制备及纯化方法，该方法采用反相介质压力液相色谱法，以硅胶键C18为固相，以MeCN/H₂O/AcOH为流动相，将收集液中的产品经萃取和重结晶后得到纯度93%及回收率30%的产品。

在这些现有技术中，均存在因纯化介质的分离因子低和柱效差的不足，而使产品的纯度达不到要求、收率较低的问题，分离效果有待进一步提高。

发明内容

本发明的目的是提供一种产品纯度高、回收率高、分离效果更好的台勾霉素B纯化方法。

为达到上述目的，本发明的技术方案是：一种用高效液相色谱纯化台勾霉素B的方法，所述方法在纯化层析柱中采用Uni30BPC单分散性聚合物微球作为填料进行柱层析。该Uni30BPC单分散性聚合物微球由苏州纳微生物科技有限公司设计、制造生产，具有对台勾霉素B分离因子高，柱效好的特点，并且能耐强酸、强碱，耐一定的压力和具有均匀的粒径。Uni30BPC单分散性聚合物微球作为填料装入层析柱中作为固定相，甲酸水溶液和有机溶剂作为流动相，填料经过预处理后先用流动相平衡。

优选的，所述方法是用Uni30BPC单分散性聚合物微球作为色谱柱的固定相，将含台勾霉素B的样品溶液上样在色谱柱上，用流动相洗脱吸附在填料上的台勾霉素B。

优选的，所述方法在装柱和纯化过程中的压力均小于4 Mpa。

优选的，所述台勾霉素B粗品用40%～80%的甲醇或乙醇水溶液溶解。

优选的，所述流动相为含有机溶剂的水溶液，其中有机溶剂为甲醇或乙腈，水溶液为含有0.1%甲酸或乙酸的水溶液。

优选的，所述用流动相洗脱吸附在填料上的台勾霉素B是先用10%～30%的乙腈或甲醇水溶液洗一个柱体积，然后再用40%～60%的乙腈或甲醇水溶液洗8～12个柱体积，即洗杂；其中水溶液为含有0.1%甲酸的水溶液。

优选的，所述用流动相洗脱吸附在填料上的台勾霉素B是先用10%～30%的乙腈水溶液洗一个柱体积，然后再用40%～60%的乙腈水溶液洗8～12个柱体积，即洗杂；其中水溶液为含有0.1%甲酸的水溶液。

优选的，所述方法在洗杂过程中所用乙腈水溶液的体积比为乙腈：水＝15～25:75～85。

优选的，所述方法在洗杂过程中所用乙腈水溶液的体积比为乙腈：水＝45～55:45～55。

本发明提供了一种分离效果更好的台勾霉素B纯化方法，本方法采用一种分离因子高、柱效高的新型介质，克服了现有技术中存在的分离因子较低和柱效差的不足，对台勾霉素B中的各种杂质都有较好的去除效果，制备的纯度高，得到的回收率高。

附图说明

图l是实施例一使用的Uni30BPC聚合物微球的扫描电镜照片。

图2是实施例一提纯前的粗品的HPLC色谱。

图3是按照实施例一、二、三、四的方法用Uni30BPC纯化后的台勾霉素B的HPLC色谱。