[发明专利]一种耐高糖β-葡萄糖苷酶-CBD融合酶及其表达基因和应用

权利要求书

1.一种耐高糖β-葡萄糖苷酶-CBD融合酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.表达权利要求1所述耐高糖β-葡萄糖苷酶-CBD融合酶的基因，其DNA序列如SEQ ID NO.2所示。

3.包含权利要求2所述核苷酸序列的重组质粒。

4.包含权利要求2所述核苷酸序列的重组质粒pET-BGL-CBD。

5.包含耐高糖β-葡萄糖苷酶-CBD融合酶基因的重组质粒制备方法，其特征在于：

（1）以Thermoanaerobacterium thermosaccharolyticum DSM571的基因组为模板，以P1和P2为引物进行PCR扩增，得到耐高糖β-葡萄糖苷酶基因的PCR扩增产物，所述引物为：

P1：CCCCATATGTCGGACTTTAACAAGGAC，下划线表示Nde I位点;

P2：CCCGGATCCAATGGTCCTAGTGGAAATAAG，下划线表示BamH I位点，并去除终止密码子；

（2）将步骤（1）所得PCR扩增产物和pET-20b分别用Nde I和BanH I双酶切，并分别割胶回收，16℃过夜连接；将连接产物转化大肠杆菌JM109感受态细胞，筛选阳性克隆，进行序列分析；挑选序列正确的克隆提取质粒，获得含有耐高糖β-葡萄糖苷酶基因的重组质粒pET-BGL；

（3）以Clostridium cellulovorans743B的基因组为模板，以P3和P4为引物进行PCR扩增，得到纤维素结合结构域基因的PCR产物，所述引物为：

P3：CCCGGATCCCCACCACCAATGTCAGTTGAATTTTACAA，下划线表示BamH I位点，斜体表示加入的连接肽，

P4：CCCCTCGAGTGGTGCTGTACCAAGAACT，下划线Xho I位点；

（4）将步骤（3）所得的PCR扩增产物和pET-BGL分别用BamH I和Xho I双酶切，并分别割胶回收，16℃过夜连接；将连接产物转化大肠杆菌JM109感受态细胞，筛选阳性克隆，进行序列分析；挑选序列正确的克隆提取质粒，获得含有融合纤维素结合结构域的耐高糖β-葡萄糖苷酶的融合酶基因的重组质粒pET-BGL-CBD。

6.包含权利要求4所述重组质粒的大肠杆菌宿主细胞。

7.权利要求1所述的耐高糖β-葡萄糖苷酶-CBD融合酶在纤维二糖降解中的应用。