[发明专利]一种发酵生产葡萄糖氧化酶的方法

权利要求书

1.一种发酵生产葡萄糖氧化酶的方法，以一种产葡萄糖氧化酶的基因工程菌为生产菌株，保藏编号为CCTCC NO：M 2012266，于2012年7月3日保藏于中国典型培养物保藏中心；其特征在于将活化后YPD扩培的菌液接入全自动发酵罐中的发酵培养基进行发酵处理，接种量为10%，以25%氨水控制pH 5.5，温度30℃，调节搅拌转速和通气量维持溶氧30%以上；当甘油耗尽DO迅速上升时，开始流加50%甘油补料生长培养基，当菌体干重达到100g/L后，停止补料；待甘油再次耗尽，继续保持基质匮乏状态约1h后，开始流加诱导培养基，诱导条件为：温度降低至20-25℃，控制甲醇和山梨醇的混合添加比例为10:1-5:1（W/W），并且维持整个诱导过程的甲醇浓度为1.5-2.5%(W/V)，诱导葡萄糖氧化酶表达。

2.一种发酵生产葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于诱导条件优选：温度降低至22°C，控制甲醇和山梨醇的混合添加比例为10:1（W/W），并且维持整个诱导过程的甲醇浓度为1.8%(W/V)，诱导葡萄糖氧化酶表达。

3.权利要求1所述的方法，其特征在于所述发酵培养基组成为（1L）：85%磷酸26.7mL/L,CaSO₄ 0.93g/L,K₂SO₄ 18.2g/L,MgSO₄·7H₂O 14.9g/L,KOH 4.13g/L,甘油40.0g/L,PTM₁ 4.35mL/L,25%氨水调pH 5.5；其中PTM₁（1L）组成为：CuSO₄,6.0g;KI,0.08g;MnSO₄,3.0g;Na₂MoO₄,0.2g;H₃BO₃,0.02g;CoCl₂,0.5g;ZnCl₂,20.0g;FeSO₄·7H₂O,65.0g;biotin,0.2g;and 98%(w/w)H₂SO₄,5mL。

4.权利要求3所述的方法，其特征在于所述补料生长培养基：50%(W/V)甘油，其中含12mL/LPTM₁。

5.权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于所述发酵诱导培养基组成为：100%甲醇，其中含12mL/LPTM₁与山梨醇其中含12mL/LPTM₁混合之比为10：1（W/W）。

6.权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于所述产葡萄糖氧化酶的基因工程菌保藏编号为CCTCC NO：M 2012266，于2012年7月3日保藏于中国典型培养物保藏中心。